陈 莉， 王红祥， 赵 湜， 李 娜， 张文静， 丁 胜

(武汉市中心医院内分泌科，湖北 武汉 430014)

糖尿病是一种以高血糖为主要特征的代谢综合征。血管并发症是糖尿病的主要并发症之一，严重影响了糖尿病患者的生活质量，其发生与血管内皮细胞及其前体细胞内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)相关。高游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)作为糖尿病血管并发症发生中的重要环节，对血管内皮细胞的作用已经有较多研究，但其对EPCs的影响及其机制均不清楚。为此，本研究将FFA作用于EPCs，观察其增殖及凋亡的变化，并检测核转录因子叉头框O1(forkhead box O1，FOXO1)蛋白的表达，以进一步了解糖尿病血管并发症中FFA所起的作用，为其防治提供实验依据。

材料和方法

1 材料

M199培养基和胎牛血清购自Gibco。牛血清白蛋白(bouvine serum albumin，BSA)和叠氮化钠购自Sigma。25 cm2培养瓶及各种培养板、离心管均购自Corning。MTT购自华美生物工程公司。胰蛋白酶购自上海生工生物工程公司。淋巴细胞分离液购自上海生化试剂二厂(比重1.077)。人纤维连接蛋白(human fibronectin，HFN)购自Chemicon。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)购自Peprotech。FITC标记抗CD34抗体和抗CD133抗体购自BD。Trizol购自Invitrogen，cDNA第1链合成试剂盒、Taq DNA聚合酶和dNTP购自Fermentas。引物由北京奥科公司合成。

2 对象与分组

32例2型糖尿病患者(DM组)均符合1999年WHO糖尿病诊断及分型标准，男21例，女11例，平均年龄(45.1±11.7)岁，体重指数(26.3±12.5)kg/m2，糖尿病病程平均(14.8±8.4)年，糖化血红蛋白(8.2% ±2.5%)，其中吸烟13例。对照组20例为来院体检的健康人，男14例，女6例，平均年龄(44.4±10.2)岁，体重指数(24.2±8.7)kg/m2。2组年龄和体重指数经 t检验，差异无显著(P＞0.05)。2组均排除了各种感染、溃疡或近期手术等可能影响EPCs和导致周围血管并发症的情况［1］。……