许吕宏， 方建培， 翁文骏， 徐宏贵

(中山大学孙逸仙纪念医院儿科，广东 广州 510120)

某些血液系统疾病如重型β－地中海贫血、再生障碍性贫血等均长期依赖输血，造血干细胞移植是目前临床上根治此类疾病的主要途径［1］。临床研究发现，在实体器官移植或造血干细胞移植前不少患者由于多次接受同种异基因输血而致敏，高敏患者发生移植排斥的风险明显增加［2］。然而造血干细胞移植与实体器官移植亦有所不同，输注的造血干细胞循环于血液系统中，与致敏受者体内的免疫细胞及抗体接触的机会更多而更易被损伤。研究发现输血致敏的主要因素之一是血液含异基因白细胞，本课题组既往通过异基因脾细胞输注方法建立了致敏动物模型［3］。本实验拟探讨异基因骨髓细胞在致敏和非致敏受者的归巢与植入情况，为开展促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者植入的策略研究提供实验基础。

材料和方法

1 动物及主要试剂

无特定病原体(SPF级)的C57BL/6(H－2Db)及BALB/c(H－2Dd)小鼠，均为雄性，6－8周，体重18－20 g，由中山大学实验动物中心提供并饲养。羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(5，6－carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE)购自 Invitrogen，RPMI－1640培养基购自Invitrogen，FITC 标记的大鼠抗小鼠H－2Db购自PharMingen。

2 致敏模型与骨髓移植

参照文献［3］建立致敏动物模型，以C57BL/6小鼠脾细胞作为刺激源，BALB/c小鼠作为致敏受者。分离C57BL/6小鼠股骨及胫骨的骨髓，洗涤后用RPMI－1640培养基将细胞浓度调为5×1010/L，台盼蓝染色检测细胞活力(＞99%)。部分骨髓细胞予荧光染料CFSE体外标记进行归巢实验。供者骨髓细胞于照射后4 h经尾静脉注射0.2 mL(1×107)到致敏BALB/c小鼠;取正常BABL/c小鼠作为非致敏模型。……