张观宇 ，许立莉 ，王建琴 ，孙凤娟 ，韩吉萍

1.辽宁省辽阳市辽化总医院病理科，辽宁辽阳 111003；2.辽宁省辽阳市辽化总医院妇产科，辽宁辽阳 111003

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，近40年来由于宫颈细胞学筛查的普遍与应用，宫颈癌和癌前病变得以早期发现、早期治疗，其发病率和死亡率明显下降[1-2]。研究资料表明，宫颈癌通常由上皮内瘤变演变而来，由于上皮内瘤变与鳞状上皮内增生、腺上皮鳞化等病变在形态上常有相似之处，单纯依靠病理形态学进行鉴别比较困难。因此，本研究在液基细胞学检查宫颈病变的基础上，观察分析其相应组织形态变化、免疫组织学Ki-67和PTEN的改变，旨在探讨其在宫颈病变诊断和鉴别诊断的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集辽化总医院2010年1月～2011年3月宫颈液基细胞学检查病例1330例，年龄24～79岁，平均年龄44.7岁。

1.2 方法

1.2.1 宫颈细胞学检查 采用进口新柏氏一次性无菌采样器，将宫颈细胞采集刷前面的刷毛伸入宫颈管并抵住宫颈，按顺时针方向旋转3～5圈，并迅速将采集刷伸入细胞保存液中反复推压、摇动。

表1 44例宫颈黏膜上皮中Ki-67和PTEN的表达

1.2.2 阴道镜检查和宫颈活检 宫颈液基细胞学检查阳性者（≥ASC-US定为细胞学阳性[1]）通过阴道镜选择可疑病灶准确定位、分点取活检。

1.2.3 病理学检查 所有标本常规制片，HE染色，从每例分点取材的标本中选取病变最显著的组织块，连续切片，超敏TMHRP法进行免疫组织化学染色，一抗Ki-67和PTEN购自北京英硕力新柏科技有限公司，选取20例宫颈炎作为对照。

1.3 结果判定

Ki-67阳性表达为胞核呈现棕黄色颗粒，在着色区域选择5个高倍视野，每个视野计数100个上皮细胞，阳性细胞数≤10%为（-），＞10%为（+）[3]。 PTEN 阳性表达为胞核呈现棕黄色颗粒，判定标准同Ki-67。

1.4 统计学分析

采用SPSS 11.0软件进行统计学处理，计数资料数据采用χ2检验，采用非参数Spearman等级进行相关检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

1330例液基细胞检查发现非典型鳞状细胞61例，组织学检查24例为上皮内瘤变，其中，CINⅠ11例，CINⅡ～CINⅢ13例。Ki-67和PTEN在24例上皮内瘤变和20例对照的表达情况见表1。对照组和低度上皮内瘤变中Ki-67和PTEN表达未见有相关性，低度上皮内瘤变和高度上皮内瘤变中Ki-67 和 PTEN 显示呈负相关（r=-0.818，P＜0.05），表 2。

表2 24例宫颈病变上皮中Ki-67和PTEN相关性分析（例）

3 讨论

从世界范围来讲，宫颈癌在年轻女性发病率有所增加。在我国，目前宫颈癌发病率居妇科恶性肿瘤首位[4]，已经成为严重威胁妇女健康的疾病[5]，为此，2006年科技部将包括宫颈癌在内的常见恶性肿瘤的预防、早诊和综合治疗纳入“十一五”国家科技重大项目，2009年中央财政拨款7640万元，在全国200个县为农村妇女免费进行宫颈癌筛查。宫颈液基细胞学检查及检测后对阳性病例做宫颈活检是目前诊断宫颈病变的有效手段，但仅仅是根据常规HE切片对于某些宫颈良性病变与低度上皮内瘤变（CINⅠ）以及低度上皮内瘤变与高度上皮内瘤变（CINⅡ～CINⅢ）的鉴别诊断存在一定的困难。

Ki-67是一种在细胞 G1、S、M、G2期均会出现的核抗原，表达的高低可以准确反映细胞增殖的情况[6]。已有研究发现，Ki-67有可能作为确定癌变人群高危个体分子标志物[7]。本组研究表明，对照组为良性病变，Ki-67多在基底层表达，即使在个别鳞状细胞乳头状增生中，Ki-67阳性细胞只是散在分布，考虑是上皮鳞化后处在不成熟阶段，增殖较活跃。低度上皮内瘤变中Ki-67阳性率升高，但与对照组的表达率差异无显著性（P＞0.05）。高度上皮内瘤变中Ki-67阳性细胞数显著增高，且阳性细胞增至上皮的中层和表层，统计学分析显示，低度上皮内瘤变和高度上皮内瘤变组间差异显著（P＜0.05）。

PTEN是1997年由Stick等3个研究小组分别发现的一种抑癌基因，定位于人类染色体10q23，PTEN由403个氨基酸组成，具有磷酸酶活性，起到阻止细胞生长和促进细胞凋亡等作用[8]。在人类的前列腺癌、子宫内膜癌、脑胶质细胞瘤等多种肿瘤中，发现PTEN蛋白表达缺失，提示该基因的表达降低与肿瘤的发生有关，但具体机制尚不清楚。本研究结果显示，PTEN在正常对照组阳性率为100%（20/20），在宫颈上皮内瘤变中PTEN阳性率下降，高度病变中仅为15.4%（2/13），且随着上皮内瘤变级别升高PTEN水平逐渐降低，说明PTEN低表达与宫颈癌的发生、发展有关。

肿瘤的发生、发展是多基因长期协同作用的结果。本研究还发现，在宫颈上皮内瘤变中Ki-67和PTEN的表达出现负相关（r=-0.818），说明Ki-67阳性同时PTEN阴性的病例具有更高的癌变风险，联合检测可以起到互相补充的作用。

综上所述，对宫颈癌的筛查和预防，临床通过涂醋白、涂碘方法只提高了宫颈病变取材的准确率，液基细胞学检查与病理组织学诊断只能简单进行分级，而联合检测Ki-67和PTEN则可以反映细胞增殖状态，对于低度和高度上皮内瘤变鉴别具有重要意义，对于高度上皮内瘤变风险评估具有重要的生物学意义，可以更好地指导临床治疗，降低对患者的损害，是早期合理预防宫颈癌的重要途径。

[1]金善姬,李点珠,崔贤子,等.液基薄层细胞学检查与巴氏涂片法临床比较应用[J].中国医药科学,2011,1(1):45-46.

[2]乐杰.妇产科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2009:263.

[3]刘彤,崔莉,许丽娟,等.P16、Ki-67蛋白表达及HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义[J].诊断病理学杂志,2009,16(5):343-345.

[4]纪小龙,张雷.诊断免疫组织化学[M].北京:人民军医出版社,2011:99.

[5]刘金凤.正确认识液基细胞学检测在宫颈病变筛查的价值[J].中国妇幼保健,2010,25(15):2167.

[6]闫丽凤,王尧影,张观宇,等.49例子宫内膜样腺癌中Ki-67和PTEN表达与临床病理特点分析[J].中国现代医生,2010,48(20):37-38.

[7]Lala PK.Significance of uitric oxide in carcinogenesis tumor progression and cancer theropy[J].Cancer Metastasis Rev,1998,17(1):1-6.

[8]Weng LP,Smith WM,Dahia PL,et al.PTEN suppresses breast cancer cell growth by phosphatase activity-dependent G1 arrest followed by cell death[J].Cancer Res,1999,59(22):5808-5814.