曹 健，王 芳，张喆，张 卿，张恩娟

(第三军医大学新桥医院药学部，重庆 400037)

口腔溃疡油是医院制剂，主要成分为酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定等。制剂中醋酸氯己定可杀菌、消炎，泼尼松龙也具有抗炎作用，酸达克罗宁有止痛作用，诸药联用可改善口腔溃疡症状。长期临床实践表明，该制剂对口腔黏膜溃疡疗效显著。笔者采用双波长反相高效液相色谱法对口腔溃疡油的盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600 Controller型高效液相色谱仪，可变紫外检测器。盐酸达克罗宁对照品(供含量测定用，批号为0756－200110)，醋酸泼尼松龙对照品(供含量测定用，批号为0796－200615)，醋酸氯己定对照品(供含量测定用，批号为0796－200615)，均由中国药品生物制品检定所提供;口腔溃疡油(医院自制制剂，批号为090713，100113，100323);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters C18柱 (150 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:0.02 mol/L 磷酸二氢钾(含 0.4% 三乙胺，pH=2.5)－ 甲醇(60 ∶40);流速:1.2 mL/min;检测波长:醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定为243 nm，盐酸达克罗宁为259 nm;柱温:25℃;进样量:20 mL。色谱图见图1和图2。

图1 259 nm波长时的高效液相色谱图

图2 243 nm波长时的高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取105℃干燥至恒重的盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定对照品 100.0，10.7，10.6 mg，置 50 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，精密量取2 mL至25 mL量瓶中，以流动相稀释到刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取口腔溃疡油2 mL，置25 mL量瓶中，用少量流动相洗涤移液管并稀释至刻度，摇匀，精密量取稀释液5 mL，置25 mL量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例，称取鞣酸、冰片，加甘油搅拌均匀，制得口腔溃疡油阴性溶液，精密量取2 mL，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，置25 mL量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀，按2.1项下的色谱条件，精密吸取20 μL注入色谱仪测定。以峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归，得回归方程，盐酸达克罗宁 Y=27968.6X －141772(r=0.9999)，醋酸泼尼松龙 Y=38105.4X －34800.6(r=0.9999)，醋酸氯己定 Y=52200.4 X －50021.2(r=0.9991)。结果表明，盐酸达克罗宁质量浓度在 80～240 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，醋酸泼尼松龙质量浓度在8.56～25.68 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，醋酸氯己定质量浓度在8.46～25.44 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取2.2项下对照品溶液，按2.1项下色谱条件重复进样6次，每次20 μL，记录峰面积值。结果盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定峰面积的 RSD分别为0.89%，1.23%，1.56%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取 2.2 项下同一供试品溶液，分别于 0，1，2，4，8，12 h时进样1次。结果盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定峰面积值的 RSD 分别为 0.82% ，1.04% ，1.21%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重现性试验:取同一批次口腔溃疡油，共6份，依法制成供试品溶液并按2.1项下色谱条件测定含量。结果样品中盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定的平均含量分别为159.68 μg/mL(RSD=1.08%)，15.408 μg/mL(RSD=0.95%)，15.632 μg/mL(RSD=1.16%)。

回收率试验:精密量取口腔溃疡油阴性溶液2 mL，以流动相稀释至25 mL量瓶中，摇匀，精密量取稀释液5 mL，至25 mL量瓶中，共 3 份，分别精密加入对照品贮备液 1.5，2.0，2.5 mL，流动相稀释至刻度，摇匀，测定含量并计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=3)

2.4 样品含量测定

精密量取不同批号口腔溃疡油2 mL，按2.2项下方法制成供试品溶液，依法测定。记录峰面积，按外标法计算其中盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=6)

3 讨论

对盐酸达克罗宁、醋酸泼尼松龙、醋酸氯己定的单组分或两组分的含量测定方法均有报道[1－4]，但3个组分同时测定的方法未见报道，且处方中冰片、鞣酸、甘油对主药测定的干扰较大。本试验考察了流动相分别为甲醇－含0.4%三乙胺(pH=2.5)的0.02 mol/L磷酸二氢钾，比例分别为 60 ∶40，55 ∶45，50 ∶50，48 ∶52，45 ∶55，40 ∶60，还考察了 Hypersil ODS 柱 (150 mm ×4.6 mm，5 μm)的分离情况，结果表明，选择现有色谱条件测定，色谱峰形较好，分离度较好，能够满足3组分的同时测定。

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