蒋 力，侯 兵，崔珂钒，闵家新

(中国人民解放军第三军医大学新桥医院胸外科，重庆 400037)

肿瘤的发生是多因素、多阶段、多步骤的复杂过程。在本研究中，笔者综合评价了重组人5型腺病毒在体外的抗肿瘤效应，揭示了其对肿瘤细胞生物学效应的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

Model 2300 CO2型细胞孵育箱(美国Shellab公司);移液器(德国Eppedorf公司)。A549细胞(由第三军医大学西南医院脑外科夏永智博士惠赠);重组人5型腺病毒(商品名安柯瑞®，上海三维生物技术有限公司，批号为20110401);RPMI 1640培养基、小牛血清均购自GibcoPBRL公司;Transwell小室、MTT试剂盒均购自美国Sigma公司;TUNEL试剂盒(上海华舜生物工程有限公司)。

1.2 试验方法

1.2.1 A549 细胞培养及传代

将复苏后的A549细胞置含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中，于5%CO2和37℃、饱和湿度的孵育箱中培养，细胞贴壁形态正常，生长良好，隔天换液并传代1次;细胞处于对数生长期、成活率大于95%时，以0.25%胰酶消化培养瓶内单层细胞，将细胞悬液移入离心管内，常温下800～1000 r/min低速离心5 min，吸去上清液，加入无血清RPMI 1640培养基，重悬细胞，计数板计数细胞。在96孔板中分3组，每组设5个复孔，每孔取3×105个/L细胞，放入孵育箱中培养24 h后用于转染。

1.2.2 细胞增殖曲线测定

采用3－(4，5－二甲基噻唑－2)－2，5－二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测加入重组人5型腺病毒(质量浓度分别为5，10，15，20μg/mL)培养时 A549 细胞(试验组)12，24，48，72 h 时内皮细胞的存活率。以正常生长的A549细胞为对照组。用含10%胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，接种到96孔板，每孔1000～10000个细胞，每孔体积200 μL，培养3～5 d后，每孔加MTT溶液(5 g/L)20 μL，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加150 μL二甲基亚砜，振荡10 min，使结晶物充分融解，选择490 nm波长在酶联免疫监测仪上测定各孔吸光度值，试验结果用细胞存活率表示。……