从RNA酶解液中分离5′-尿苷酸
2011-07-27李德莹丁庆豹
化学与生物工程 2011年12期
李德莹,丁庆豹
(1.三峡大学化学与生命科学学院,湖北 宜昌 443002;2.华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237)
核苷、核苷酸是构成生物遗传信息DNA和RNA的基础,在生物细胞的物质代谢和能量转换中起着重要作用。核酸的分解产物及其衍生物在食品、医药和保健领域应用广泛[1~3]。核苷酸类物质的应用源于5′-肌苷酸呈鲜味性质的发现,20世纪70年代以来,核苷酸及其衍生物在抗病毒和抗癌方面受到医药界的普遍重视,现在普遍使用的利巴韦林、齐多夫定、拉米夫定、氟铁龙等均为核苷酸的衍生物。其中尿苷酸(UMP)参与肝解毒物质葡萄糖醛酸酐的生物合成,用于治疗肝炎,还可作为生产核酸类药物、保健食品及生化试剂的中间体,如用于合成尿苷三磷酸(UTP)、聚腺尿、氟铁龙等药物。
传统的UMP制备方法通常是先采用1根阳离子交换柱分离4种单核苷酸[4~6],分别得到UMP、胞苷酸(CMP)、腺苷酸(AMP)的稀溶液和鸟苷酸(GMP)、CMP的混合液;再将UMP调pH值后,上阴柱分离纯化、浓缩。该法存在树脂利用率低、4种核苷酸不易完全分离、UMP的质量较差、分离周期较长、环境温度较高时上柱液容易滋生微生物等问题;若要进行工业化生产,还需要增加洗脱液贮罐[7]。肖林平[8]研究了一种新的阳离子交换树脂,可以将4种核苷酸在该阳柱上分离,但各产品色谱峰之间几乎没有距离,导致流出液产品收集存在一定困难。
作者在此采用串联的阳离子交换柱在酸性条件下首先吸附AMP、CMP和GMP,未经吸附的UMP流经弱碱性树脂柱和强碱性树脂柱后,经洗脱、浓缩、干燥,得到高纯度的UMP。……
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