罗 俊，高淑红，陈长华，叶蕊芳，武 培，赖 珅，马朝安

(1.华东理工大学生物工程学院 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237；2.河南天方药业股份有限公司，河南 驻马店 463003)

螺旋霉素[1](Spiramycin，SPM)是十六元大环内酯类抗生素，对于感染性疾病治疗具有临床应用和推广价值，在其它领域也有进一步拓展的空间。其主要成分为螺旋霉素Ⅰ(SPMⅠ)、螺旋霉素Ⅱ(SPMⅡ)、螺旋霉素Ⅲ(SPMⅢ)。根据干燥标准品计算，效价应不低于4100 IU·mg-1，其组分要求为：SPMⅠ≤80.0%，SPMⅡ≤5.0%，SPMⅢ≤10.0%；三者的总和应不少于90%。

在螺旋霉素发酵过程中，主要杂质UNK4与主要组分SPMⅠ仅差一个甲基[2]。陈剑锋等[3]在研究甲基化因子对西索米星发酵过程的影响时，发现加快甲基化反应速率有助于增加西索米星前体物质的积累，改变其部分代谢通路，可大大提高发酵组分。氯化胆碱在代谢中与蛋氨酸和甜菜碱类似，可以提供生物化学过程所需要的甲基。因此，作者在此研究了在发酵过程中添加氯化胆碱对发酵产螺旋霉素及组分的影响，进而优化螺旋霉素发酵的培养条件。

1 实验

1.1 仪器

FUS-15L型自动控制发酵罐，华东生物技术工程公司；JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机，宁波新芝科学仪器研究所；717 Plus-Auto sampler型HPLC分析仪，Waters公司。

1.2 菌株和培养基

生二素链霉菌(Streptomycesambofaciens)，河南天方药业。

二级种子培养基：糊精，黄豆饼粉，玉米浆，酵母粉，豆油，(NH4)2SO4，KH2PO4，NaCl，MgSO4，CaCO3，pH值6.4。

摇瓶发酵培养基：糊精，黄豆饼粉，玉米浆，酵母粉，豆油，(NH4)2SO4，KH2PO4，NaCl，KCl，Zn2SO4，CoCl2，MgSO4，CaCO3，pH值6.4。

1.3 方法

1.3.1 摇瓶发酵

一级种子培养：250 mL三角瓶装量为30 mL，(27±0.5)℃、220 r·min-1培养48 h。

摇瓶发酵：250 mL三角瓶装量为25 mL，(27±0.5)℃、220 r·min-1培养6 d。

考察了不同甲基化试剂、氯化胆碱添加条件对螺旋霉素发酵的影响。……