陆少燕，宗素进，杜苗苗，林 刚，杜季梅

（温州医学院 检验医学院，浙江 温州 325027）

幽门螺杆菌（Helicobactor pylori，Hp）是人类常见的致病菌，是慢性胃炎、消化性溃疡等多种消化道疾病的重要致病因素之一，与胃癌的发生密切相关，1994年国际癌症组织将其确定为I类致癌原。

蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物幼芽与树干上采集的树胶与其上颚腺分泌物和蜂蜡等混合加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶成分复杂，已知成分包括多酚类（黄酮、酚酸及其酯类）、萜类、甾类、氨基酸及挥发性物质，不仅在抗肿瘤、抗氧化、抗炎症和免疫调节等方面具有重要的生物活性［1］。中医药文献记载，蜂胶具有润肤生肌、解毒杀菌、祛风止痛之功效，在民间有服用蜂胶酒治疗胃病的习惯。国内外研究证明，蜂胶不仅对多种细菌、真菌、病毒等有抑制和杀灭作用，还具有抗氧化、增强巨噬细胞吞噬、促进肿瘤细胞凋亡等作用［2］。

根据前期试验结果，作者选择黑龙江纯蜂胶，用95%乙醇溶解后，对Hp进行体外抑菌实验，结果报道如下。

1 材料

1.1 原料与试剂

菌株：NCTC11637，由浙江大学严杰教授馈赠；培养基：哥伦比亚培养基（CMO331），10%脱纤维绵羊血 （购自杭州新锐生物工程有限公司）；纯蜂胶：购于黑龙江省牡丹江市小蜜蜂生物工程有限责任公司；溶剂：乙醇，分析纯；其他：无菌蒸馏水、6号新华滤纸、游标卡尺等。

1.2 仪器与设备

手提式不锈钢蒸汽灭菌器，艾奇小厌氧罐，电热恒温培养箱，双人单面净化工作台。

2 方法

2.1 蜂胶纸片制备

称取纯蜂胶100g，磨碎后溶于200mL95%乙醇中（稀释度为1∶2），连续2倍倍比稀释至1∶1024，得到不同浓度的蜂胶溶液。用打孔器将6号新华滤纸打成直径为6mm的圆形纸片，121℃高压蒸汽灭菌15～20min，烘干备用。每张滤纸片加不同浓度蜂胶溶液7μL，以95%乙醇作空白对照。37℃放置1h，制成含量不同的药敏纸片，4℃避光保存备用。

2.2 H.pylori固体培养基的配制

称取哥伦比亚琼脂干粉19.5g，加入蒸馏水450mL，用121℃高压蒸汽灭菌15～20min，待冷却到50℃，加50mL脱纤维绵羊血，配成含10%纤维绵羊血的哥伦比亚培养基，倾倒于无菌培养皿。

2.3 菌液的制备

将H.pylori于厌氧罐中在37℃孵箱内培养3天，用布氏肉汤将其洗脱配制成悬液，通过酶标仪检测幽门螺杆菌浓度，将其制备为108CFU／mL的布氏肉汤菌液。

2.4 抑菌试验

将108CFU／mL的布氏肉汤菌液接种到哥伦比亚血平板后，用镊子小心将不同浓度药敏纸片贴于平板上。每个平板贴三片，呈正三角形，每个浓度纸片共重复4次。置厌氧培养罐中，37℃培养72h，游标卡尺测量抑菌圈直径，记录测量结果。

3 结果

不同浓度蜂胶纸片对幽门螺杆菌（H.pylori）的72h抑菌作用结果见表1。

4 讨论

蜂胶含有黄酮类、酚类、内酯、醛、酮、甾类等化合物，同时为无毒、无刺激、无致癌性，并具有抗菌、抗病毒、免疫激、镇痛、促进组织再生等作用，因此蜂胶享有“紫色黄金”美誉。咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester，CAPE）是蜂胶中的主要活性成分［3］，它作为抗氧化药物和癌预防药物研究的明星分子，受到了人们极大关注。CAPE对胃的保护通过阻止幽门螺杆菌及其诱发的细胞因子Kappa B蛋白降解，而且CAPE能够抑制由幽门螺杆菌诱发的细胞增殖以及细胞因子TNF－alpha及IL－8的生成，另外CAPE还可以阻断幽门螺杆菌诱发的COX－2的表达。经CAPE预处理的胃上皮细胞同样能够阻断细胞因子和细胞分裂素诱发的 NF－kappaB和 AP－1的表达［4］。

表1 不同浓度蜂胶纸片对幽门螺杆菌（H.pylori）的72h抑菌作用结果（）

表1 不同浓度蜂胶纸片对幽门螺杆菌（H.pylori）的72h抑菌作用结果（）

稀释度 蜂胶含量（μg／片） 抑菌圈直径（mm）实验序号 抑菌圈直径（mm）1 2 3 41∶2 3500.0 31.10 33.10 31.40 33.00 32.15±0.911∶4 1750.0 32.88 30.00 30.40 29.80 30.77±1.241∶8 875.0 29.10 27.60 30.20 28.20 28.78±0.981∶16 219.00 27.60 24.40 29.20 32.80 28.50±3.021∶32 437.50 28.88 25.20 29.04 27.80 27.73±1.541∶64 109.50 25.80 23.20 24.96 23.08 24.26±1.161∶128 54.80 21.80 20.30 23.96 23.4 22.36±1.431∶256 27.40 20.40 24.00 20.80 22.2 21.85±1.411∶512 13.70 16.30 22.80 18.40 18.32 18.96±2.371∶1024 6.80 15.00 14.00 17.00 16.6 15.65±1.21

目前为止，关于蜂胶的临床研究报道不多，Boyanova L等认为保加利亚蜂胶有很强的剂量依赖的抑菌活性［5］。Boyanova L等认为利用干燥的蜂胶纸片得到的保加利亚蜂胶具有重要的抗幽门螺杆菌的活性，也能够抑制大肠弯曲菌以及空场弯曲菌的生长，蜂胶在幽门螺杆菌感染的预防与治疗方面具有巨大的潜力［6］。

本试验结果表明，95%乙醇溶解的黑龙江纯蜂胶在不同浓度下对幽门螺杆具有较好的抑制作用，抑菌作用随浓度降低而变小，从含量看明显较陈炼等［7］报导的江西蜂胶效果好。与常用抗菌药物相比，含6.80μg／片的蜂胶纸片抑菌圈直径可达15.65mm，这与克拉霉素（15μg／片，＞17mm敏感，14～17mm中度敏感，＜14mm耐药），呋喃唑酮（300μg／片，＞16mm 敏感，15～16mm 中度敏感，＜15mm耐药），以及羟氨苄青霉素（40μg／片＞16mm 敏感，14～16mm中度敏感，＜14mm耐药）相当［8］。鉴于蜂胶不仅具有抗幽门螺杆菌的作用，还具有促进组织愈合和抑制细胞增殖等作用，在抗生素类药物的耐药性问题日益突出的情况下，蜂胶作为一个多效的天然药物，在幽门螺杆菌感染相关疾病治疗方面可能具有广阔的应用前景。

［1］符军放，曹炜，索志荣，等.高效液相色谱法识别蜂胶特征组分及定量对比［J］.西北大学学报：自然科学版，2006，36（4）：587－591.

［2］MOK RYEON AHN，SH I GENORI KUMAZAWA，YUM I KO USU I，et al.Antioxidant activity and const ituents of propolis collected in variou areas of China［J］.Food Che mistry.，2007，101（4）：1383－1392.

［3］QIAN YIPING，WANG QI，CAO XIAOYAN.Structure－Activity Relationship for Anti－Haemolysis and Cytotoxicity A－gainst HL－60Cells of Caffeic Acid Phenethyl Ester Derivatives［J］.ACTA BIOPHYS ICA S INICA，2010，26（4）：294－300.

［4］ABDEL－LATIF MM，WINDLE HJ，HOMASANY BS，et al.Caffeic acid phenethyl ester modulates Helicobacter pylori－induced nuclear factor－kappa B and activator protein－1expression in gastric epithelial cells［J］.Br J Pharmacol.，2005，146（8）：1139－1147.

［5］BOYANOVA L，GERGOVA G，NIKOLOV R，et al.Activity of Bulgarian propolis against 94Helicobacter pylori strains in vitro by agar－well diffusion，agar dilution and disc diffusion methods［J］.J Med Microbiol.，2005，54（5）：481－483.

［6］BOYANOVA L，DEREJIAN S，KOUMANOVA R，et al.Inhibition of Helicobacter pylori growth in vitro by Bulgarian propolis：preliminary report［J］.J Med Microbiol.，2003，52（5）：417－419.

［7］陈炼，廖旺娣，李国华，等.江西蜂胶对幽门螺杆菌的体外抑菌作用研究［J］.江西医学院院报，2009，12（49）：27－28，32.

［8］中国药品生物制品检定所.抗菌药物药敏试验判断标准［S］.1991：1.