一种改良的真菌总RNA提取方法

2011-07-19张洁

山西农业科学 2011年12期

关键词：方法

张洁

（山西农业大学信息学院，山西太谷030801）

总RNA提取技术是一项分子生物学基本实验技术，目前已建立了许多RNA提取方法[1-3]。实验室小规模提取总RNA最常用的是Chomezynski等[4-5]提出的异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法，对大多数的动植物材料都能得到质量很好的RNA样品。但对富含多糖、糖蛋白等次生物质的材料如大部分的真菌却不适用，因为利用该方法提取的真菌RNA富含RNA酶，其会造成RNA的化学降解，会使多糖以及糖蛋白形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来[6]。

本研究对提取多糖、多酚的棉花RNA取得良好结果的CTAB酸酚法进行了改进，以棉花黄萎病菌株VD8的菌丝为材料，通过适当增加变性剂的浓度，有效地抑制RNA酶活性，用LiCl选择性沉淀RNA和醋酸钠沉淀祛除多糖，旨在为分子生物学实验的顺利进行提供便利。

1 材料和方法

1.1 实验材料

用保存在试管里的棉花黄萎病菌株VD8（由江西农业大学遗传与种质资源实验室惠赠）复壮于PDA培养基上培养5 d，将PDA培养基的黄萎病病菌菌落接种到装有已灭菌的100 mLCzapek’s液体培养基的250 mL平底烧杯中，25℃振荡培养8～10 d。然后将黄萎病菌系培养物经4层纱布过滤，用液氮速冻纱布上的菌丝，保存于-80℃冰箱中备用。

1.2 试剂

RNA 提取缓冲液：1.4 mol/L NaCl，0.1 mol/L Tris·HCl（pH 值为 8.0），20 mmol/L EDTA，2%CTAB，2%PVP，2% β- 巯基乙醇；8 mol/LLiCl；异丙醇；70%乙醇；0.4 mol/L NaOH；3 mol/L NaAc（pH值为5.2）；Tris平衡酚；氯仿；氯仿∶异戊醇（体积比24∶1）溶液；DEPC处理过的水。