张亚密 王希胜 赵艳莉 王院春 张莉莉 杜 鹃

陕西中医学院附属医院(咸阳 712000)

龙花胶囊系陕西中医学院附属医院肿瘤内科王希胜主任医师的研究精华,临床用于治疗恶性肿瘤放、化疗后血小板减少症,疗效确切。我们采用腹腔注射环磷酰胺复制成化疗后血小板减少症模型,观察龙花胶囊对模型小鼠骨髓巨核细胞的影响。

1 材料与方法 1.1 实验动物 昆明小鼠 60只,雄性,6～8周龄,体重 18～22g,购于西安交通大学实验动物中心。

1.2 主要试剂及药品 中成药龙花胶囊,配方组成:仙鹤草 50g,花生衣 50g,大枣 10枚;制备方法:将花生衣乙醇提取液与仙鹤草、大枣水提取液合并、浓缩、干燥、粉碎、制粒、整粒、干燥、装胶囊,0.35g/粒 (生药含量为 0.1675g/粒,由陕西中医学院附属医院制剂中心配制)。巨和粒 1.5mg/支(齐鲁制药有限公司,国药准号:S20030016)。环磷酰胺 200mg/支(山西普德药业有限公司,国药准号:H14023686)。

1.3 主要仪器设备 超净工作台、电子天平、解剖显微镜、CKX31-A12PHP-O LIM PU S倒置显微镜、X S2-81光学显微镜等。

1.4 实验方法 将 60只雄性昆明小鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、巨和粒组(C组)、龙花胶囊小剂量组(D组)、中剂量组(E组)和大剂量组 (F组),每组 10只。先用标准饲料喂养 1周后,除空白对照组 (A组)外,其余 50只依据新药研究指导原则[1]及徐氏[2]介绍方法,腹腔注射环磷酰胺75mg/kg,每日 1次,连续 3d,以小鼠停药后 3d左右血小板计数下降至注射环磷酰胺前计数的 20%～30%为造模成功的标准。 A、B组每日用生理盐水 0.4mL/只/天灌胃,C组每日用巨和粒 0.25μg/g皮下注射,D、E、F组分别以 42mg/mL、84mg/mL、168mg/mL浓度的龙花胶囊药液 0.4mL灌胃,各组每日用药 1次,连续用药 14d。造模后第 14天颈椎脱臼处死小鼠,剪下股骨,用 2.5mL注射器吸取少量的 PBS缓冲液,向骨髓腔内快速推入,冲洗出骨髓细胞,继而定量涂片、风干后瑞氏-姬姆沙染色、油镜下计数 1.0mm×1.0mm范围内骨髓巨核细胞数,每只小鼠本骨髓片制作 3张,取平均值。

1.5 统计学方法 采用 SPSS17.0软件进行统计分析,所得到数值以均数±标准差表示,各组之间的两两比较用配对t检验,以 P＜0.05作为显著性差异的标准。

2 结 果 实验结果表明:与模型组对比较,中药大、中剂量组、巨和粒组均能促进骨髓巨核细胞增值,中药大剂量组与巨和粒组相比无显著性差异 (P＞0.05),中药中、小剂量组与巨和粒组相比有显著性差异(P＜0.05)。各组小鼠骨髓巨核细胞计数比较见附表。

附表 骨髓巨核细胞计数比较(个/mm2)(± s,n=10)

附表 骨髓巨核细胞计数比较(个/mm2)(± s,n=10)

注:与空白对照组比较★P＜0.05,有显著性差异;与模型对照组比较▲P＜0.05,有显著性差异;与巨和粒组比较●P＞0.05,无显著性差异。

组 别 n(只) 骨髓巨核细胞计数空白对照组 10 29.65± 2.77模型组 10 7.46± 1.60★巨和粒组 10 30.84± 3.28▲中药小剂量组 10 8.61± 1.96★中药中剂量组 10 13.26± 1.39★▲中药大剂量组 10 29.55± 2.85▲●

4 讨 论 化疗引起血小板减少症是指在化疗期间及之后较长的一段时间内,化疗药物破坏了骨髓内巨核细胞增殖成熟与外周血液中血小板衰老之间的平衡,导致外周血血小板不同程度的降低[3]。血小板的产生是由造血干细胞在造血微环境中经过多种调节因子的复杂作用下逐步完成的。造血干细胞(HSC)在造血组织中数量很少,但有多向分化的潜能,故也称多能造血干细胞(PHSC)。它具有高度自我更新和自我复制的能力。对于血小板生成而言,最早的造血干细胞称为全能造血干细胞,即淋巴-骨髓造血干细胞,它分化为髓系限制性干细胞,这种干细胞可进一步分化为巨核系祖细胞,继之分化为巨核细胞,该细胞体积巨大,成熟的巨核细胞边缘部分破裂脱落后形成血小板,每个巨核细胞平均能生成 2000个左右的血小板[4]。骨髓巨核细胞是生成血小板的物质基础,因而研究骨髓巨核细胞对于研究血小板减少症具有十分重要的病理学意义。

龙花胶囊是王希胜主任医师在其临床经验方“花红汤”、“龙花汤”基础上经过反复临床验证,根据临床需要及疗效,筛选、优化处方组合,并经过多种制剂研究研制而成的复方中药制剂。由仙鹤草、花生红衣和大枣三味组成,花生衣别名长果衣、落花生衣、红薄皮,性味甘、涩、平,入肺、脾、肝经,有止血散瘀、消肿之功;仙鹤草性平,味微苦辛,无毒,入肺、肝、脾经,具有止血健胃之功效;大枣甘、微温,入脾、胃经,有补中益气、养血安神、抗癌的功效,大枣水提取物可缓解肿瘤病人放、化疗后骨髓抑制的不良反应[5]。三味相伍健脾养胃、益气摄血。临床观察花红汤 (花生衣 50g,仙鹤草 30g,大枣 10枚 )治疗肿瘤化疗后血小板减少症 50例,结果 7d后血小板升高绝对值＞ 20×109/L者占 90%[6];在常规化疗基础上加用龙花汤预防化疗后血小板减少症,与单纯化疗组对照,结果显示加用龙花汤(花生衣、仙鹤草各 50g,大枣 10枚)组较单纯化疗组血小板抑制情况轻[7]。为便于患者服用 ,将花红汤研制成龙花胶囊。王春霞等用龙花胶囊治疗化疗后血小板减少患者,治疗组化疗后口服龙华胶囊连服 21d,对照组不治疗。结果显示治疗组血小板减少分级明显优于对照组[8]。本实验结果显示:中药大、中剂量组、巨和粒组都能促进骨髓巨核细胞增值,中药大剂量组与巨和粒组相比无显著性差异(P＞0.05);由此提示:一定浓度的龙花胶囊药液能促进骨髓巨核细胞增值,有促进血小板生成的作用。

[1]中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编[M].1993:103.

[2]徐叔云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994:1106-1107.

[3]朱红叶,郭 勇.恶性肿瘤化疗骨髓抑制的中西医结合治疗[J].浙江中西医结合杂志,2008,18(10):615.

[4]Deutsch V R,Tomer A.Megakaryocyte development and platelet pro-duction[J].BrJ Haematol,2006,134(5):453-466.

[5]张民庆,龚惠明.抗肿瘤中药的临床应用[M].北京:人民卫生出版社,2000:348-349.

[6]张 杨,王希胜.花红汤治疗肿瘤化疗后血小板减少症的疗效观察[J].中外健康文摘,2008,(02):79.

[7]张亚密,赵艳莉.“龙花汤”预防化疗后血小板减少症 30例临床观察 [J].江苏中医药,2009,41(10):42.

[8]王春霞,王希胜.龙华胶囊治疗化疗后血小板减少症疗效观察 [J].实用中西医结合临床,2010,10(1):44-45.