感特灵胶囊质量控制研究

2011-07-09聂会生杜庆堂陕西省中医药研究院西安710003

陕西中医 2011年12期

聂会生李芳刘珍陈萍杜庆堂陕西省中医药研究院(西安 710003)

特灵胶囊由黄芩、牛黄、柴胡、板蓝根、对乙酰氨基酚等组成的中西药复方制剂,具有清热解毒,清肺止咳之功效,用于感冒初期引起的咳嗽,流清涕,头痛目眩等症[1]。为了更好地控制该制剂的质量,参照有关文献[2-5],本实验采用了 TLC法对制剂中的黄芩、牛黄、川贝、乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏进行了定性鉴别,采用 RP-HPLC法对制剂中黄芩的主要有效成分黄芩苷进行了含量测定。

1 仪器与材料 KQ-2500超声清洗仪(昆山检测仪器厂);UV-8三用紫外分析仪(无锡科达仪器厂);939薄层制板器(重庆市南岸贝尔德仪器技术厂);101A-2型干燥器 (上海实验仪器总厂);GalaxyTM 160D十万分之一及 Galaxy110型万分之一电子天平(美国 OHAUS公司);美国 Watets公司高效液相色谱仪:510型高效液相泵,490E型紫外检测器,U6K进样阀,820色谱数据工作站,TCM柱温控制器,MILLIPORE溶剂过滤器;微量注射器 (10 μL,20 μL);Phenomenex C18(250mm× 4.6mm,5 μ m)色谱柱;TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。黄芩对照药材(批号 120955-200607,供鉴别用);黄芩苷(批号 110715-200815,供含量测定用);川贝母对照药材(批号 121000-200806,供鉴别用);西贝碱对照品(批号 0714-9903,供含量测定用);胆酸(批号 100078-200414,供含量测定用);去氧胆酸(批号110724-200207,供鉴别用)均购自中国药品生物制品检定所。感特灵胶囊(自制,批号 110301、110302、110303)。

硅胶 G(薄层层析用,化学纯)购自青岛海洋化工厂;色谱用水均为超纯水,由 D7428超纯水仪(Barnstead产品)制备;甲醇为色谱纯溶剂 (德国MERCK),其它试剂均为分析纯(购自西安化学试剂厂)。

2 方法与结果 2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 黄芩的薄层鉴别:取本品内容物 4g,研细,加甲醇 50m L,超声处理 30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1mL使溶解,作为供试品溶液。同时,按本品的制备工艺,制得不含黄芩的制剂,同供试品溶液的处理方法,制成黄芩的阴性对照溶液。另取黄芩对照药材1g,同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010年版一部附录 VI B)试验,吸取上述 4种溶液各 2～4 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶 G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水 (5:3:1:1)为展开剂,预平衡 30min,展开,取出,晾开,喷以 1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显一相同的暗绿色斑点,且阴性对照无干扰。

2.1.2 牛黄的薄层鉴别:取本品内容物 0.5g,研细,加氯仿 20m L,超声处理 30min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 1mL使溶解,作为供试品溶液。同时,按本品的制备工艺,制得不含牛黄的制剂,同供试品溶液的处理方法,制成牛黄的阴性对照溶液。另取胆酸、去氧胆酸对照品,加乙醇制成每 1mL各含 2mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010年版一部附录 VI B)试验,吸取上述 3种溶液各 2 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸 (15:7:5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 105℃烘约 5min,置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性对照无干扰。

2.1.3 川贝的薄层鉴别:取本品内容物 10g,研细,加浓氨试液 2mL与三氯甲烷 50mL,振摇,放置过夜,滤过,滤液蒸干,残渣加三氯甲烷 1mL使溶解,作为供试品溶液。同时,按本品的制备工艺,制得不含川贝母的制剂,同供试品溶液的处理方法,制成川贝母的阴性对照溶液。另取川贝母对照药材 5g,同法制成对照药材溶液。再取西贝碱对照品,加三氯甲烷制成每 1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010年版一部附录 VI B)试验,吸取上述 4种溶液各 4 μ L,分别点于同一以 0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上,以三氯甲烷—甲醇—浓氨(8:2:0.2)的溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与药材色谱相应的位置上,显相同颜色的红色斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同的红色斑点,且阴性对照无干扰。

2.1.4 对乙酰氨基酚马来酸氯苯那敏的薄层鉴别:取本品内容物适量(约相当于对乙酰氨基酚 0.2g),研细,加三氯甲烷 20mL,振摇,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取对乙酰氨基酚与马来酸氯苯那敏对照品,加三氯甲烷制成每 1mL中含对乙酰氨基酚10mg与马来酸氯苯那敏 0.15mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2010年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(6:4)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中使显色。供试品色谱中,分别在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件与系统适应性试验:色谱柱:Phenomenex C18柱 (250mm× 4.6mm,5 μ m);流动相:甲醇 -水 -冰醋酸 (44∶ 55∶ 1);检测波长为 277nm;流速为 1.0mL◦ min-1;柱温为 30± 0.5℃;进样量为 10 μL。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

2.2.2 对照品溶液的制备:取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1m L含 0.02mg的溶液,作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,取约 0.3g,精密称定,置 100mL量瓶中,加甲醇适量,超声提取 30min,取出,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取 1mL,置 10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μ m)滤过,作为供试品溶液。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备:取缺黄芩的阴性对照样品,同供试品溶液的制备方法,制备成阴性对照溶液。

2.2.5 干扰试验:照 2.2.1项下色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各 10 μL,分别依次进样。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有色谱峰出现,而阴性对照液在黄芩苷色谱峰位置处无相应峰出现,表明阴性无干扰。 (见图 1)

图1 黄芩苷对照品及样品色谱图

2.2.6 线性关系考察:精密称取黄芩苷对照品5.1mg,加甲醇制成 1mL含 0.0255mg的黄芩苷对照品溶液 ,分别取对照品溶液 2、4、8、12、16、20 μL,依次测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归,得标准曲线方程:Y=2E+08X+1E+06,r=0.9995。表明,黄芩苷在 0.051～0.510 μ g范围内,峰面积值与进样量(μ g)有良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验:精密吸取供试品溶液(批号110301),重复进样 6次 ,每次 10 μL,按 2.2.1项下色谱条件进样,记录黄芩苷峰面积积分值,RSD为 0.73%(n=6)。

2.2.8 稳定性试验:取同一供试液(批号110301),分别在 0、2、4、6、8、10h进样 ,测得样品中黄芩苷峰面积值,结果 RSD=0.95%,说明溶液中黄芩苷在 10h内较稳定。

2.2.9 重复性试验:按拟定的含量测定方法,以同一批样品(批号 110301)分别制备 6份供试品溶液,测得峰面积,计算含量。黄芩苷含量(mg◦粒-1)的RSD为 1.82%(n=6)。

2.2.10 加样回收试验:取已知含量的样品(黄芩苷含量:12.04mg/粒)6份,每份 0.15g,精密称定,分别加入浓度为 1.0032 mg◦ mL-1的黄芩苷对照品溶液6mL、6m L、6mL、6mL、6mL、6mL,按 2.2.3项下操作,依法制备,进样,测定峰面积,按下列公式计算回收率,结果见表 1。