何 杨，段 斐，靳 祎，王恩军

(1河北大学基础医学院，河北保定071000;2华北油田总医院)

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(Fructus Corni)的干燥果肉，又名山萸肉、药枣、肉枣等。其味酸、涩、微温，归肝肾经，有补益肝肾、涩精固脱之功效，是我国的传统中药材［1，2］。现代药理研究发现山茱萸对肿瘤细胞有明显的抑制作用［3～5］。2010年5～11月，我们采用人宫颈癌Hela细胞作为实验模型，研究山茱萸水提取物体外抗宫颈癌活性，探讨山茱萸的抗癌机制，为其临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料 山茱萸水提取物由河北农业大学生命科学院提供，每1 g相当于原生药2 g。制成500 mg/ml的溶液，高压灭菌4℃保存，原生药购自河北安国。人宫颈癌细胞株Hela由河北农业大学生命科学院提供。

1.2 仪器与试剂 CO2培养箱:美国SHELDON公司;净化工作台:苏净集团苏州安泰空气技术有限公司;酶标仪:郑州博塞生物工程公司;倒置显微镜:上海光学仪器五厂;48孔及96孔培养板:美国Costar公司;胎牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司;DMEM培养液和胰蛋白酶:GIBCO公司;顺铂:齐鲁制药有限公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO):美国Sigma公司;琼脂糖:北京拜尔迪生物公司;200 bp DNAmaker:华美生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 将Hela细胞贴壁生长于DMEM完全培养液体系(含10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100 U/ml)，置于37℃、饱和湿度、5%CO2的培养箱中进行培养，待细胞长至对数生长期时用DMEM完全培养基将细胞浓度调整为1×105个/ml的细胞悬液待用。

1.3.2 MTT法检测山茱萸水提取物对Hela细胞增殖的抑制作用 按1×105个/ml的细胞密度将Hela细胞接种到96孔培养板中，终体积为每孔200 μl。……