李 倪，李建文，朱争艳

(1天津医科大学三中心临床学院，天津300170;2天津市第三中心医院;3天津市第三中心医院人工细胞重点实验室)

子宫内膜癌是女性生殖器恶性肿瘤之一，多见于老年妇女，近年来随着生活水平的提高、人口的老龄化、激素替代治疗的广泛应用，其发病呈年轻化趋势。2007年1月～2010年6月，我们采用免疫组化法检测了子宫内膜癌组织标本中脂联素、抵抗素的表达，探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用。

1 材料与方法

1．1 材料 选择我院手术切除的子宫内膜癌组织标本40份(内膜癌组)，均经病理检查确诊，且术前未行放化疗及6个月未用激素替代治疗;其中子宫内膜腺癌36例、浆液性癌2例、腺鳞癌1例、透明细胞癌1例;FIGO 分期(2009)［1］Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期7例;肿瘤为高分化18例，中分化12例，低分化10例。另取同期住院手术病理确诊为不典型增生标本30份(增生组)及正常增殖期子宫内膜标本30份(正常组)。各组一般资料无统计学差异。主要试剂:脂联素兔抗人多克隆抗体及抵抗素兔抗人多克隆抗体均购自北京博奥森生物工程有限公司，免疫组化试剂盒及DAB试剂购自武汉博士德生物工程有限公司。

1．2 脂联素、抵抗素表达检测 所有标本均经中性甲醛固定、石蜡包埋、4 μm切片用于染色。采用乳腺癌组织和已知的组织作为阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。切片在70℃下烘烤1 h后，经二甲苯脱蜡及梯度乙醇(100%、95%、80%和75%)水化，0．01 M的柠檬酸钠缓冲液(pH 6．0)热修复组织切片，冷却至常温后滴加3%H2O2常温孵育10 min，正常山羊血清封闭15 min，按步骤分别滴加一抗工作液(浓度均为1∶100稀释)，生物素化二抗及DAB显色，常规苏木素复染，氨水返蓝，脱水，透明，封片后显微镜下观察。结果判断:低倍镜下细胞质内出现棕黄色颗粒或片状为阳性表达。高倍镜视野(400×)摄像，IPP5．1计算该视野的积分光密度(IOD)，观察10个视野取平均值。

1．3 统计学方法 采用SPSS17．0统计软件，计量资料均以±s表示，多组间均数的比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Spearman秩相关分析。检验水准 α =0．05。

2 结果

2．1 脂联素、抵抗素表达 见表1。

表1 各组脂联素、抵抗素表达比较(IOD值，±s)

表1 各组脂联素、抵抗素表达比较(IOD值，±s)

注:与正常组比较，*P ＜0．01

组别 n 脂联素 抵抗素内膜癌组 40 28．37 ±8．51* 22．22 ±5．59*增生组 30 29．03 ±8．03* 15．81 ±5．06*正常组30 36．40 ±9．98 10．49 ±4．80

2．2 脂联素、抵抗素表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系 见表2。

2．3 相关性分析 子宫内膜癌组织中的脂联素的表达与抵抗素的表达呈负相关(r=－0．337，P＜0．01)。

3 讨论

脂联素也被称为ACRP30、apM1、adipoQ或GBP2，是一种新发现的脂肪分泌的内源性生物活性多肽或蛋白质。其通过与其受体结合而发挥特异的生物学效应，具有增加脂肪酸氧化，抑制肝糖原的再生，提高葡萄糖摄取量、改善胰岛素抵抗、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗血管生成的作用。现有流行病学资料显示，脂联素水平与多种激素依赖性肿瘤的发生呈负相关，如乳腺癌、结直肠肿瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、胃癌。Takemura等［2］首次用原位杂交的方法证明正常子宫内膜组织在月经周期中均有脂联素及其受体的表达，脂联素在增生早期的表达高于其他月经时期。本研究内膜癌组及增生组的脂联素表达水平明显低于正常组，提示低的脂联素水平可能与子宫内膜癌发生、发展有关。此与体外研究发现脂联素能直接抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1及RL95-2 增殖，诱导其凋亡一致［3］。Rzepka-Górska 等［4］研究子宫内膜癌患者血浆脂联素水平时发现，脂联素水平与肿瘤的分期无关，而与肿瘤的分化程度有关。张丽志等［5］用ELISA法检测64例子宫内膜癌患者血浆脂联素水平，发现脂联素水平与肿瘤的分化、分级均有关。本研究也发现，脂联素表达与子宫内膜癌分化程度及FIGO分期均有关，这可能与本实验样本量少，组织类型单一有关，有待进一步进行大量本、多中心的研究。

表2 脂联素、抵抗素表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系(±s)

表2 脂联素、抵抗素表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系(±s)

临床病理参数 n 脂联素 P值 抵抗素 P值分化程度高分化 18 34．44 ±6．20 17．29 ±3．02中分化 12 27．35 ±5．85 ＜0．05 24．72 ±3．42 ＜0．05低分化 10 18．66 ±4．41 28．10 ±2．93 FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期 33 30．83 ±7．14 ＜0．05 21．06 ±5．27 ＞0．05Ⅲ、Ⅳ期7 16．75 ±2．76 27．71 ±3．47

抵抗素是Ghosh等［6］通过小鼠研究治疗糖尿病药物噻唑烷二酮类时发现的一种新的脂肪细胞因子，在白色脂肪组织中特异性表达。而人的抵抗素在白色脂肪组织中几乎不表达，主要表达于单核、巨噬细胞。人类抵抗素基因位于第19号染色体，以二聚体形式分泌入血循环，可减弱脂肪细胞、肝细胞、骨骼肌细胞对胰岛素的敏感性，诱导胰岛素抵抗，导致空腹血糖升高，糖耐量降低，高胰岛素血症。而高胰岛素血症可能导致高雄激素血症，进而增加癌症的风险。且现有研究表明，抵抗素与乳腺癌、结直肠肿瘤、前列腺癌的发生有关［7］。本研究内膜癌组及增生组的抵抗素表达水平明显高于正常组，表明抵抗素在子宫内膜癌的病理发展中起一定作用;抵抗素表达与肿瘤分化程度相关，与肿瘤分期无关，这与体外研究抵抗素能诱导前列腺癌细胞的增殖，在高分化前列腺癌中表达水平明显高于低分化癌一致［8］。但有研究显示，高水平抵抗素能诱导绒毛膜癌细胞的侵袭力，且能促进血管内皮细胞的生成［9］。这可能与本研究样本量少，组织类型单一有关。本研究还显示，子宫内膜癌中两者表达呈负相关。

总之，脂联素可能在子宫内膜癌的发生、发展中起抑制作用，而抵抗素可能起促进作用。

［1］Creasman W．Revised FIGO staging for carcinoma of the endometrium［J］．Int J Gynaecol Obstet，2009，105(2):109．

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［3］Cong L，Gasser J，Zhao J，et al．Human adiponectin inhibits cell growth and induces apoptosis in human endometrial carcinoma cells，HEC-1-A and RL95-2［J］．Endocr Relat Cancer，2007，14(3):713-720．

［4］Rzepka-Górska I，Bedner R，Cymbaluk-Poska A，et al．Serum adiponectin in relation to endometrial cancer and endometrial hyperplasia with atypia in obese women［J］．Eur J Gynaecol Oncol，2008，29(6):594-597．

［5］张丽志，温克，刘荣，等．子宫内膜癌患者血清脂联素水平变化及意义［J］．山东医药，2010，50(26):4-5．

［6］Ghosh S，Singh AK，Aruna B，et al．The genomic organization of mouse resistin reveals major differences from the human resistin:functional implications［J］．Gene，2003，305(1):27-34．

［7］Nakajima TE，Yamada Y，Hamano T，et al．Adipocytokines as new promising markers of colorectal tumors:adiponectin for colorectal adenoma，and resistin and visfatin for colorectal cancer［J］．Cancer Sci，2010，101(5):1286-1291．

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［9］Simone ND，Nicuolo FD，Sanguinetti M，et al．Resistin regulates human choriocarcinoma cell invasive behaviour and endothelial cell angiogenic processes［J］．J Endocrinology，2006，189(3):691-699．