季仁升，孙黔云，乙 引

(1.贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳 550001;2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002)

蛇毒中含有大量以蛋白质为主的生物活性物质，主要影响机体的血液循环系统、神经系统和肌肉组织等，开展蛇毒研究对蛇伤防治、相关生命科学研究、新药研发具有重要的意义和价值［1］。原矛头蝮蛇(Protobothrops mucrosquamatus)，又称烙铁头蛇(Trimeresurus mucrosquamatus)，属蝰蛇科原矛头蝮属，主要分布在我国的南方地区和台湾地区，是一种常见剧毒蛇，属血循毒。其蛇伤临床表现主要为出血、肿胀、严重时流血不止。迄今为止，已经从原矛头蝮蛇毒中分离纯化出数个蛋白，涉及L-氨基酸氧化酶、磷脂酶 A2、凝集素、纤溶酶等［2－4］，但总体上对其研究较少。本文报道了湖南产原矛头蝮蛇毒中一个新颖丝氨酸蛋白酶的分离纯化与相关性质研究。

1 材料与方法

1.1材料原矛头蝮蛇毒采集于湖南省武陵山区;蛋白分离介质 DEAE Sephadex A-50凝胶、Sephadex G-75凝胶、Sephacrycl S-100凝胶、Heparin HP凝胶、Hitrap Q HP预装柱、低分子量蛋白质标准Marker、凝胶过滤测定分子量试剂盒、两性电解质Ampholine(pH 3.5～10)均购自瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司;兔抗绵羊红细胞抗体(溶血素)、乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N，N，N'，N'-tetraacetic acid，EGTA)、牛纤维蛋白原、苯甲酰-L-精氨酸乙酯(Nα-Benzoyl-L-arginine ethyl ester hydrochloride，BAEE)、偶氮酪蛋白(azocasein)、十二烷基硫酸钠(SDS)购自美国Sigma公司;增强型BCA蛋白定量试剂盒购自江苏碧云天生物技术研究所;绵羊红细胞采自贵阳医学院实验动物中心，混合人血清由本实验室健康志愿者献血制备而得;昆明种小鼠购自第三军医大学大坪医院实验动物中心，合格证号:SCXK(渝)2007-0005;其它试剂均为进口或国产分析纯。……