管世鹤，潘 颖，杨 凯，沈继龙，杨东亮

(安徽医科大学1.第二附属医院检验科，2.人兽共患病安徽省重点实验室，安徽 合肥 230032;3.华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室，湖北武汉 430030)

HBx蛋白(Hepatitis B virus X protein)是HBV X基因编码的多功能蛋白，不仅能够影响细胞内信号转导途径如:ERK、SAPK-JNK、p38、Ras-Raf-MAP、PI-3-K途径等［1－2］，还在病毒的转录复制、肝细胞癌的发生发展等过程起到重要作用［3－4］。有研究报道［5］，激活的ERK信号转导途径可能会影响 α干扰素(IFN-α)诱导的JAK-STAT信号转导途径分子的表达，但HBx蛋白能否通过ERK信号转导途径抑制IFN-α抗病毒活性目前尚不清楚。为此，本研究以HepG2细胞为研究模型，通过基因转染等技术分析HBx蛋白能否影响IFN-α抗病毒蛋白表达，并通过ERK抑制剂PD98059抑制ERK信号转导途径，进一步探讨HBx蛋白可能存在拮抗IFN-α抗病毒活性的分子生物学机制。

1 材料和方法

1.1主要材料转染试剂盒脂质体LipofectamineTM2000与RNA提取试剂盒Trizol Reagent购自Invitrogen公司。逆转录试剂盒Reverse Transcription System购自Promega公司。RT-PCR引物由上海生物工程有限公司合成。IFN-α1b购自深圳科兴生物工程有限公司。兔抗人抗-磷酸化ERK，兔抗人抗-STAT1抗体、兔抗人抗-磷酸化STAT1抗体购自Bioworlde公司。二抗购自中杉金桥公司。PD98059购自Promega公司，质粒pcDNA3.1(-)购自Invitrogen公司。重组质粒FL1-145HBx由美国Drexel大学医学院Dr.Clippinger惠赠，HepG2细胞由本实验室保存。

1.2细胞的培养及分组处理HepG2细胞用含10%小牛血清、1×105U·L－1青霉素、1×105U·L－1链霉素、2 mmol·L－1谷氨酰胺 DMEM 培养液培养。转染前一天行HepG2细胞传代，并以5×107·L－1接种6孔板。接种后2 d待细胞汇合约为75%时，按试剂盒说明书步骤分别混合质粒pcDNA3.1(-)或 FL1-145HBx 4μg与 LipofectamineTM2000 250 μl至无血清DMEM行转染。HepG2细胞分为4组，对照组(CG):HepG2细胞……