劳海红 贺宪民

1.海南省妇幼保健院(海口，570206);2.海南主健细胞分子遗传医学检验中心

5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)是叶酸代谢通路中的关键酶。MTHFR C677T与神经管缺陷(NTDs)的关联关系研究在国内和国外开展很普遍，TT基因型是NTDs发生的遗传危险因素;MTHFR A1298C、MTRR A66G也都在国内和国外的人群中被研究证明与NTDs的发生相关。神经管缺陷是一类发生率高、后果严重的出生缺陷，是遗传因素和环境因素共同作用的结果，为多基因遗传疾病［1］。本研究的目的在于比较海南省汉族和黎族妇女人群MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G多态性分布情况，获得群体遗传学特征，了解叶酸代谢相关基因在不同人群的分布，为不同人群预防出生缺陷制定针对性的干预措施提供科学依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

依据知情同意，选择在海南省各保健院进行孕前或孕期检查的女性作为研究对象，其中，汉族10 533人，黎族904人。

1.2 仪器及试剂

Centrifuge离心机(德国艾本德公司);7900HT实时荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司);3730测序仪、9700 PCR扩增仪、荧光定量缓冲液、荧光定量检测探针、BigDye® Terminator v3.1测序试剂盒、测序缓冲液(ABI公司)和POP－7TM3730/3730xl DNA测序胶(美国生命技术公司)。检测中对3个位点分别进行荧光定量PCR反应，反应所用Taqman－MGB探针信息见表1。

表1 Taqman－MGB探针所在位置

1.3 研究方法

1.3.1 样本DNA采集 采集受检者的口腔黏膜上皮细胞，利用柱式抽提试剂盒抽提样本DNA。

1.3.2 基因检测 MTHFR 基因 C677T、A1298C和MTRR基因A66G位点的SNP分型采用Taqman－MGB技术。

1.3.3 荧光定量PCR反应条件 每个反应体系为总体积 10μl，包含浓度为 20ng/μl的 DNA 模板1μl，2 × Taqman Universal MasterMix 5μl，20 × Taqman－MGB 探针0.5μl，去离子水3.5μl。……