杨德全，鞠厚斌，葛菲菲，刘 健，王 建，周锦萍，刘佩红

(上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103)

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是由日本学者Notomi等[1]于2000年开发的一种新型核酸扩增技术，该技术针对靶基因的6个特定区域设计4种特异引物，利用具有链置换DNA聚合酶（Bst DNA聚合酶），在60℃ ～ 65 ℃温度范围，短时间内实现对核酸的有效扩增，LAMP反应中可形成明显的白色焦磷酸镁沉淀，可通过对浊度的观察或加入荧光染料，肉眼直接颜色变化来判定反应结果。该技术具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点，已广泛应用于细菌、病毒、寄生虫等病原体的检测研究，并取得了理想的效果。本文就该技术方法及其在动物疫病检测中的应用研究进展综述如下。

1 LAMP技术原理

LAMP技术利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶和根据不同靶序列设计的两对特殊的内、外引物，即正向内侧引物（forward inner primer，FIP）、 正 向 外 侧 引 物（forward outer primer，F3）、反向内侧引物(backward inner primer，BIP)、 反 向 外 侧 引 物(backward inner primer，B3)，特异性识别靶序列上的6个独立区域，启动循环链置换反应。在LAMP反应中，内引物杂交在目标DNA区，启动互补链合成，导致哑铃状DNA产生。这种结构很快以自身为板，进行DNA合成延伸，形成茎-环DNA结构，然后以此结构作为LAMP循环的起始结构。由于内引物杂交在茎-环的环上，引物链置换合成的DNA产生一个有缺口的茎-环DNA中间媒介，在茎上附有目标序列。再通过外引物，在茎的末端形成环状结构，结果在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物，见图1。

图1 LAMP反应……