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猪源TTV Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

2011-06-08侯军委周艳君王礞礞李国新童光志

中国动物传染病学报 2011年2期
关键词:标准检测

侯军委,周艳君,王礞礞,李国新,于 海,童光志

(中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241)

TTV(Torque teno virus,TTV)又称输血传播病毒(Transfusion Transimitted Virus),该病毒最初是由日本学者Nishizawa等采用代表性差异分析法从一名输血后发生急性感染的非甲~戊型肝炎患者血清中发现的[1]。此后,很多国家对本国不同人群中TTV感染进行了流行病学调查,发现人群的TTV DNA阳性率一般在10%以上[2]。随后发现该病毒在自然界各种动物中存在广泛,能感染人类、灵长类和家养动物包括猪、鸡、牛、羊、猫和狗[3]。

TTV是一种无囊膜的单股负链环状DNA病毒,目前,该病毒被归为圆环病毒科,指环病毒属[4]。感染不同动物的TTV基因组长度也不同,感染人和猿的TTV基因组长度为3.7~3.9 kb,感染猪和狗的TTV基因组长度分别为2.8 kb和2.9 kb左右,而在猫体内获得的TTV其基因组长度则约为2.1 kb[5]。目前对于TTV的编码基因尚未完全确定,有人认为TTV含有4个放阅读框(ORF1~ORF4)[6],也有人认为含有6个开放阅读框(ORF1~ORF6)[7]。

已知感染猪的TTV共两种基因型,即TTV1和TTV2[8]。有学者对西班牙猪群感染TTV的情况进行了回溯性调查,发现从1985年到2005年的所有年份均检出TTV,母猪和肉猪中,TTV1感染率分别为34.2%和30.9%,TTV2感染率分别为46.6%和62.8%,TTV1和TTV2共感染则分别为19.8%和24.5%[9]。有报道证实,欧洲野猪群中TTV感染的总阳性率为84%,其中TTV1和TTV2阳性率分别为58%和66%[10]。目前,应用于猪源TTV检测的方法仍然以常规PCR为主,但常常敏感性不够;套式PCR虽然敏感性更高,但容易出现假阳性。近年来实时荧光定量PCR技术以其特异性强、灵敏度高、重复性好、快速高效等特点在病原检测以及基因表达水平分析等方面得到了广泛应用。……

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