张 旭，滕巧泱，闫丽萍，周洁文 ，徐大伟,颜丕熙，姬希文，戴晓光，王洪斌，高 利，李泽君

(1.中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫重点开放实验室，上海 200241;2.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030)

流感病毒（Influenza virus）属正黏病毒科流感病毒属，是一种带囊膜，基因组为单股，负链、分节段的RNA病毒。流感病毒的基因组分为8个片段，编码11个蛋白。NS基因是流感病毒基因组中最小的基因节段。NS基因编码NS1和NS2两种蛋白，研究表明，NS1为流感病毒唯一的非结构蛋白（nonstructural protein, NS）[1]。NS1蛋白含有两个核定位区，分别为第34～38位氨基酸残基和第203～230位氨基酸残基处。在这两个核定位信号的作用下，NS1蛋白在细胞质中合成后很快向核内转移，并积聚在病毒感染早期的细胞核内，在感染后期NS1则聚积于核仁中[2]。NS1除了在核内聚集之外，在多核糖体上也有发现。在NS1表达的情况下，与病毒mRNA结合的多核糖体明显增多，增加了病毒mRNA的翻译起始率，说明NS1蛋白在病毒基因表达或病毒mRNA复制方面起到很重要的作用[3]。除此以外，另有学者发现流感病毒的NS1蛋白在病毒逃离宿主免疫反应的过程中起着重要的作用。NS2蛋白的主要功能是介导组装好的vRNPs从细胞核输出到细胞质中，该功能通过M1蛋白与vRNPs发生联系，也有研究表明NS2在病毒RNA合成过程中具有调节作用[4]。

为了将外源基因片段插入到流感病毒不同基因片段的包装信号之间，研究人员尝试拯救含外源基因的流感病毒。本研究中，为扩增在NS1基因的包装信号之间插入外源基因的流感病毒，我们用逆转录病毒系统，成功的将流感病毒PR8株的NS1基因整合进入MDCK细胞基因组中，建立了稳定表达NS1蛋白的MDCK-PR8-NS1细胞系。……