谷化平 尚培中

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一。大量研究表明，结直肠癌的形成和转移的发生是一个多基因、多因子共同作用的结果。我们采用免疫组化方法，探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelil growth factor,VEGF)和张力蛋白同源物基因(phoshatase and tension homology deleted on chromosome fen,PTEN)蛋白表达与结直肠癌浸润、转移的关系，及EGFR、VEGF与 PTEN蛋白表达之间的相关性，为预测结直肠癌浸润转移提供客观参考指标。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 选取我院2004年～2010年手术切除的结直肠腺癌标本98例(结肠癌57例，直肠癌41例)，男性67例，女性31例，平均年龄(52.4±11.8)岁。取20例同期患者远癌切缘处正常大肠黏膜组织(距癌灶>4cm)作为对照组。标本均经40 g/L中性福尔马林液固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

1.1.2 试剂 鼠抗人EGFR、VEGF、PTEN抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司(均为即用型)。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 采用微波-链霉菌素-生物素(MW-LSAB)免疫组织化学法和应用微波-金属盐抗原修复技术。即切片常规脱蜡水化后,放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，pH 6.0)内,用微波仪(YWY781A医用型)170 W辐射5 min,冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法,所不同者为三步抗原孵育和正常血清封闭用微波仪130 W分别辐射5 min,保温2 min即可。实验用已知EGFR、VEGF和 PTEN表达阳性的胃癌组织作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。H2O2-DAB显色。

1.2.2 结果判断 EGFR以细胞质和细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性，VEGF以细胞质、PTEN以细胞核呈现棕黄色颗粒为阳性。根据阳性细胞比例分为4级：无阳性细胞为阴性(-);阳性细胞数<25%为弱阳性(+)，25%～75%为阳性(++)，>75%为强阳性(+++)；(+)以上为阳性表达。

1.3 统计学处理

采用χ2检验比较组间阳性率差异。