吴 涛，毛娅卿，王 嘉，王 哲，蒋桃珍

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

鸡新城疫(ND)是一种具有高度传染性的病毒性疾病，世界各地养禽业均采用疫苗进行免疫接种来控制鸡新城疫的发生［1］。鸡新城疫病毒HB1株(Ⅱ系)和F株(Ⅲ系)是制备鸡新城疫低毒力活疫苗的生产用毒种，《中华人民共和国兽用生物制品规程》［2］(二〇〇〇年版)中规定，鸡新城疫病毒HB1株和F株，在－15℃以下，保存期为6年。对疫苗生产用毒种的繁殖冻干与检定，不仅需要较长的时间，还消耗一定的人力、物力和财力，增加污染外源病毒的机会，因此需要对毒种制定更加合理的保存期。

1 材料和方法

1.1 材料 鸡新城疫病毒HB1株(Ⅱ系)，本实验室分别在1993年6月、1997年3月、2003年2月繁殖冻干，检定合格后交菌种保藏室－70℃保存。鸡新城疫病毒F株(Ⅲ系)，本实验室分别在1989年12月、1995年4月、2001年3月繁殖冻干，－70℃保存。鸡新城疫强毒(北京株)，中国兽医药品监察所2006年6月冻干、检定，－70℃保存。

SPF鸡:1月龄，SPF鸡胚:10日龄，均购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 毒种病毒含量测定 每批冻干的毒种在试验时从－70℃冰柜中任取3支，按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》(二〇〇〇年版)中病毒含量测定方法，分别按瓶签注明的装量加灭菌生理盐水恢复后，继续做10倍系列稀释至 10－9，取10－7、10－8、10－9三个滴度，各经尿囊腔途径接种 10日龄SPF鸡胚5枚，每胚接种0.1 mL，至37℃条件孵育，每日照蛋。孵育120 h后，取出所有活胚，逐个收获胚液，分别测定血凝价;48～120 h死胚(48 h以前死胚，弃去不计)同一稀释度等量混合，分别测定血凝价，计算EID50。

1.2.2 毒种……