杨云春，周 贤，伍佳丽，姜 鲜，周述芝，王晓斌

(泸州医学院附属医院麻醉科，四川 泸州 646000)

大脑皮质神经元参与了意识的形成和维持意识清醒，而皮质功能是通过各种离子通道完成，其中钠离子通道开放引起的去极化内向电流是其产生动作电位的关键。咪达唑仑是目前临床上广泛应用的镇静催眠药，其作用位点与神经元电压门控型钠离子通道有关[1];而芬太尼为阿片类镇痛药，但镇静效果欠佳。两者临床上常小剂量复合应用于局部麻醉强化用药，但其联合应用后发生协同效应的原因目前还不完全清楚，亦未见相关文献报道。本实验选择大脑皮质神经元作为研究对象，观察镇静剂量咪达唑仑和芬太尼对大脑皮质神经元上的钠离子通道电流的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

选SD新生大鼠(1～3 d)，雌雄不拘，清洁级，由泸州医学院实验动物中心提供;膜片钳放大器(AXOPA/PFTCH200B Axon Instruments USA)，微管电极拉制器(PC-10NARISHIGE JAPA/PFN)，倒置相差显微镜(AXIOVERT135 ZEISS GERMANY)，A/D、D/A 转换器(DIGIDATA-1200Axon Instruments USA)，二氧化碳孵箱(1815Tc SHEL-LAB U.S.A)，数据处理系统pClamp软件(10.1)(Axon Instruments);咪达唑仑(2 mg/2 ml)、芬太尼(0.01μg/2 ml，湖北宜昌人福药业有限公司)，TTX(河豚毒素，大连瑞芳化学公司)。

1.2 实验方法与分组

1.2.1 细胞培养 选用1～3天SD新生大鼠大脑皮层神经元行原代培养。取培养第4～9天的细胞用于全细胞膜片钳记录。

1.2.2 膜片钳实验记录 应用全细胞膜片钳法进行记录，选用形态呈锥体形，有一较长轴突和1～3个树突的细胞进行记录，用经100%O2饱和的细胞外液做持续灌流。两步法拉制玻璃微电极，内充电内液后，阻抗2～5 MΩ。采样频率20kHz，低通滤波1 kHz，在电极尖端与细胞膜接触形成巨阻封接(＞1 GΩ)后，吸破尖端膜片形成全细胞状态，补偿电容和串联阻抗后，进行下一步电流记录。……