杨 滨，娄晓明，吴春丽，李婉萍

银杏(Ginkgo biloba L.)是木本孑遗植物，其叶、果和外种皮皆可入药。银杏外种皮是银杏种子的外皮层，包含有大量的银杏多糖、银杏内酯、黄酮及被称作银杏酚、酸的化合物等多种物质。有报道表明，银杏外种皮多糖(Ginkgo biloba exocarp polysaccharides，GBEP)对胃癌、肺癌及肝癌细胞的生长具有一定的抑制效果［1-3］，但其在宫颈癌方面的研究较少。本文研究体外银杏外种皮对人宫颈癌细胞增殖及迁移的影响，探讨其对宫颈癌的治疗作用。

1 实验材料

1.1 细胞株及培养方法 细胞株:Siha细胞株购自中科院，由本实验室传代保存。细胞培养:用含有10%小牛血清的高糖RPMI1640培养基，37℃饱和湿度、5%CO2培养箱中培养，细胞贴壁生长，每2～3天传代1次。

1.2 实验仪器及试剂 酶标仪(BIOTEKElx800);AE30/31倒置相差显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司);HF90 CO2细胞培养箱(上海力申科学仪器有限公司)。细胞培养用试剂购自Hyclone公司，RNA prep pure动物组织总RNA提取试剂盒，TIANScript cDNA第一链合成试剂盒，2×Taq Real Master Mix(SYBR Green)购自天根生物科技(北京)有限公司，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，抗体购自Abcam公司，噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司，ELISA检测试剂盒购自RB公司，其他试剂为国产分析纯。

2 实验方法

2.1 银杏外种皮粗多糖的制备 称取适量银杏外种皮，置于圆底烧瓶中，按料液比1∶10、沸水浸提1 h，在热水浴中回流浸提3次，冷却后过滤，合并上清液。上清液经减压浓缩，三氯乙酸脱蛋白，离心，调pH至中性，加入一定体积的95%乙醇，使终浓度为80%。充分搅动，静置沉淀，所得沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，真空干燥即可得粗多糖。……