欧阳伟，王永山*，马金荣,，张海彬

(1.江苏省农业科学院兽医研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095)

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种危害雏鸡的急性高度接触性传染病。IBDV感染不仅可导致患病鸡死亡，而且引起鸡的免疫抑制，造成疫苗免疫失败[1-7]。

IBDV属于双RNA病毒科双RNA病毒属，基因组包括大(A)小(B)两个片段。VP1是病毒的非结构蛋白，由B片段编码的一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp)，与病毒RNA的复制和毒力有关[8-10]。VP2是病毒的主要结构蛋白之一，由A片段编码的多聚蛋白加工而成，位于病毒粒子的外表面，占总结构蛋白量的51%，属于病毒的主要保护性抗原，与病毒中和抗体的诱导、抗原和毒力的变异以及细胞凋亡的诱导等有关[11]。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)能够使mRNA发生降解而导致基因表达沉默[12-13]。RNAi被认为是机体阻止外来病毒感染、保护细胞免受病毒入侵的一种细胞自我保护机制[14]。

本实验室前期的研究采用体外转录的方法分别制备了3个靶向VP1和3个靶向VP2的小干扰RNA(Short interfering RNA，siRNA)，在鸡胚成纤维细胞(CEF)中的功能分析表明，3个VP1-siRNA和3个VP2-siRNA均能明显抑制IBDV复制，其中VP1-siRNA2550和VP2-siRNA392的抑制效果最为显著[15]。在此基础上，本实验选择这两个高效siRNA，构建了由chU6启动的靶向IBDV VP1和VP2基因的双拷贝shRNAs重组表达质粒，鉴定其在CEF及鸡胚中对IBDV复制的抑制效果，为新型抗IBDV生物制剂与疫苗设计探索新的技术途径。

1 材料和方法

1.1 病毒株及主要试剂 IBDV B87 CEF适应病毒株和鸡胚适应病毒株为本实验室保存；……