董炳梅，唐 娜,2，王金良,2，苗立中,2，沈志强,2*

(1.山东绿都生物科技有限公司；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600)

猪增生性肠炎(Porcine proliferative enteritis，PPE)是由胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis，LI)引起的猪的接触性传染病。主要引起6周龄～20周龄的生长肥育猪出现急性出血性下痢，间歇性下痢、食欲下降和生长缓慢等临床症状。该病呈世界性分布。相关文献显示，猪群的患病率为15%～35%，患病猪日增重量可降低0.012 kg±0.01 kg[1-2]。造成的经济损失严重。

LI是一种专性胞内寄生菌，无法在无细胞培养基中培养[3]，因此常规细菌学方法不能对PPE进行诊断。国外使用的诊断方法主要有组织病理学诊断、血清免疫学诊断以及分子生物学诊断技术[4]。PCR方法检测样本需要量小、操作相对简便、耗时短、特异性高，可以检测到pg级的细菌DNA[5]，因此该方法已成为较常用的PPE诊断方法。本试验根据PPE的发病情况，并针对粪便样品检测灵敏性普遍较低的现象，最终选取固相吸附法提取DNA并结合PCR技术的方法，进一步提高了LI检测的敏感性与特异性，为PPE的有效诊治提供了参考方法。

1 材料和方法

1.1 菌株、病毒株与血清 LI菌株为本实验室分离；大肠杆菌(E.coli)、沙门氏菌(Salmonella)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和伪狂犬病病毒(PRV)均由本实验室保存；PPE血清、肠道组织与粪便样品均采自山东地区某PPE未免疫猪场。

1.2 主要实验材料 异硫氰酸胍(GuSCN)购自百灵威化学技术有限公司；TaqDNA聚合酶和dNTPs均购自宝生物(大连)生物工程公司；PPE ELISA诊断试剂盒购自Savnova Biotech AB公司。

1.3 引物设计与PCR扩增 固相吸附法提取样品基因组DNA，根据GenBank登录的LIaspA基因(AM180252.1)设计上下游引物，PPE-1：5'-GCAGCA CTTGCAAACAATAAACT-3'；……