武警陕西总队医院(西安 710054) 徐 皓 程随涛 张衍国 吕雅洁 张惠中 余春艳

银屑病是一种表皮过度增殖为特征的慢性皮肤病,发病机理尚不明确,近年来研究表明银屑病皮损中成纤维细胞存在异常,认为成纤维细胞可能是银屑病发病的重要因素之一。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作为一种炎症因子,在银屑病的发病中具有重要作用,我们采用 GeneChip Human Genome U133 Plus2.0芯片研究以 TNF-α为刺激条件下,寻常型银屑病患者成纤维细胞基因表达谱的变化情况,为进一步研究成纤维细胞在银屑病发病中的作用提供相应的理论支持。

材料与方法

1 材 料 胎牛血清购自杭州四季青公司,DMEM、PBS购自 GIBCO公司,硫酸链霉素、氨苄青霉素购自华北制药股份公司,TRIZOL购自INVIT ROGEN公 司,TNF-α购 自 ABD公司。GeneChip Human Genome U133 Plus2.0芯片为Affymetrix公司产品。

2 方 法 ①成纤维细胞的培养:见参考文献[1]。利用小鼠抗型胶原一抗进行细胞鉴定。②TNF-α对皮肤成纤维细胞基因表达影响的检测:实验组加入 TNF-α15ng/ml,72h培养,空白对照组未加。贴壁细胞培养诱导结束后,弃去培养液基。加入 Tizol,按照Trizol总 RNA抽提试剂盒说明书分别提取总 RNA,用电泳及分光光度计测 A260/A280鉴定 mRN A质量。 RNA定量,反转录合成双链 cDNA并进行纯化。用Bio Array High Yield RNA Transcrip tLableling体转录合成生物素化 cRNA。cRNA片断化,与Affymetrix133芯片杂交、染色、洗涤。

3 统计学分析 用 Microarray SuitVersion 5.0和 Data Mining Tool Version 2.0获取芯片杂交信息,进行数据处理和分析。采用 Genmapp和 Mappfinder进行功能聚类和途径分析,该软件中的数据库(生物途径图)来源于 KEGG数据库,并与 Gene Ontology(GO)Consortium链接,在 Genmapp运行结果的基础上,对基因差异表达数据在分析生物过程、分子功能和细胞组分进行聚类分析,并进行显著相关性统计分析。……