刘新亮，德 英，赵来喜

(1.中国农业科学院草原研究所，内蒙古 呼和浩特 010010； 2.中国农业科学院研究生院，北京 100081)

垂穗披碱草(Elymusnutans)为禾本科(Gramineae)小麦族(Triticeae)披碱草属(Elymus)多年生疏丛型草本植物，又名钩头草、弯穗草[1]，染色体组构成为StStYYHH(2n=42)[2]。国外主要分布于俄罗斯、土耳其、印度、蒙古等地，我国主要分布于西北、西南、华北地区[1]。垂穗披碱草根茎分蘖能力强，具有极强的抗寒性和抗旱性，能适应各种不同类型的土壤，滩地、沟谷、阴坡山麓地带到灌丛草甸和高山草甸均能生长。开花期前垂穗披碱草质地柔软，无刺毛、刚毛，无异味，为马、牛、羊喜食牧草，整个生长季节粗蛋白含量变化幅度较小，属中上等品质牧草[1-6]，同时也是最具经济意义的草种[7-8]。简单序列重复区间(inter-simple sequence repeat，ISSR)是Zietkiewicz等[9]于1994年创建的以重复序列的单一引物为主要引物序列的PCR标记，它结合了SSR和RAPD的优点，主要特点是操作简单，遗传多态性高，重复性好，耗资少，模板DNA用量少。基于这些优点，ISSR分子标记已广泛应用于牧草种质资源鉴定、牧草遗传多样性与分类进化、DNA指纹图库的建立、亲缘关系分析、遗传图谱构建、分子标记辅助育种等方面的研究[10]。ISSR分子标记在披碱草属植物研究中的应用多见报道[11-12]，而其在垂穗披碱草研究中应用相对较少。ISSR分子标记反应条件易受模板DNA、dNTPs、Mg2+、TaqDNA聚合酶、引物等因素的影响，ISSR扩增结果，若以单因素试验，难免忽视其互作效应，而正交试验能够分析各因素之间的内在规律，具有均衡分散、整齐可比和效应明确的优点，能较快地找到最优组合，找出影响扩增的主要因素和次要因素[13]。……