郭庆，王忠跃，孔繁芳，武艳霞

（中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193）

1983年美国PE Cetus公司人类遗传研究室的Kary Mullis发明了聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）[1]，该体外核酸扩增技术具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，被广泛应用于基础研究，成为分子生物学、鉴别遗传疾病和快速检测病毒和病菌感染必不可少的研究工具。1992年日本人Higuchi想实时观察PCR反应的全过程，最终达到检测样品中的DNA量的目的，最早提出了实时荧光定量PCR的设想[2,3]，继而由1996年美国Applied Biosystems公司首先推出实时荧光定量PCR技术。由于传统的PCR技术都是依赖于产物的终点浓度进行分析的，存在不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其应用受到局限，直到近年来荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）技术用于PCR定量后，上述问题才得到较好的解决[4]，随着实时荧光定量PCR的发明，此技术在不同研究领域都发挥出重要作用[5～8]。

实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR）是在常规PCR技术基础上把荧光共振能量转移与荧光标记探针相结合，并巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术融合在一起的一项创造性技术，该技术不仅实现了对DNA模板的定量，它具有实时性、快速、灵敏、高通量、特异性强、自动化程度高、重复性好、准确定量等特点。

近年来，实时荧光定量PCR技术不断完善，取得了突飞猛进的发展。由于该技术本身的优越性，被广泛应用于医疗检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因检测、病原体检测、动植物检测、食品安全等不同研究领域[9,10]。……