石国勋，郑祥雄，任天丽

(1无锡市第二人民医院，江苏 无锡 214002;2福建医科大学附属协和医院)

研究发现，类风湿关节炎(RA)滑膜中破骨细胞的大量形成是引起RA软骨和骨破坏的关键因素。破骨细胞分化刺激因子(ODF)为NF-κB配基受体激活剂，与骨保护素(OPG)一起是调节破骨细胞形成和活化的重要因子［1］。2005年1月～2006年7月，本实验用佐剂性关节炎(AA)模型模拟人RA的早期临床表现，研究滑膜中ODF基因表达与破骨细胞形成和活化的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级SD大鼠20只，雌性，体质量为(200±10)g，由上海实验动物中心提供。Trizol试剂为Gibco公司产品，RT-PCR试剂盒为Promega公司产品，完全弗氏佐剂、TRAP染色试剂盒为 Sigma公司产品。

1.2 方法

1.2.1 AA大鼠模型的制备 20只SD大鼠随机分为两组各10只，麻醉后一组于右足垫皮下注射完全弗氏佐剂0.1 ml(模型组)，另一组大鼠注射0.1 ml的生理盐水(对照组)。

1.2.2 滑膜及其关节的组织病理学检测 于模型制备后30 d断头处死大鼠，分离病变的膝关节，经脱钙、脱水，常规石蜡包埋切片、HE染色。同样方法处理对照组大鼠关节滑膜组织。

1.2.3 滑膜组织总RNA抽提 提取滑膜组织，Trizol试剂盒提取RNA，干燥后用DEPC处理的去离子水50 μl溶解RNA，用核酸紫外分析仪检测RNA的含量。

1.2.4 RT-PCR 法检测滑膜中 ODF、OPG、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)基因表达 按照逆转录试剂盒步骤逆转录合成cDNA，产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定。凝胶电泳经Fuji Film图像处理，输入Image Master VDS凝胶成相系统做灰度扫描，进行基因表达强度分析。结果以目的条带与内参照β-actin的灰度比值表示。

1.2.5 滑膜组织破骨细胞TRAP染色 用TRAP染色试剂盒进行组织化学染色，按说明书进行操作。……