陆 伟，秦 燕，丁润生，尹 红

(南通大学附属医院，江苏 南通 226001)

急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性髓系白血病(AML)的一个特殊类型，95%以上APL存在 t(15;17)(q22;q21)染色体易位，产生PML-RARα融合基因，是APL诊断和微小残留病(MRD)的重要分子标志［1］。根据 PML基因的断裂位点不同，PML-RARα融合基因可分为3种，分别为L型、V型S型，在PML-RARα融合基因中所占比例分别为50%、5%、45%［2］。我们应用一步法实时荧光定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)针对上述最特异、最常见的恶性克隆基因片段，检测APL患者初诊及缓解后融合基因转录本mRNA的表达，探讨其在APL患者诊断及MRD检测中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2008年6月～2011年4月在南通大学附属医院血液内科就诊的初发APL患者42例，男27例、女15例，年龄18～64岁、中位年龄36岁;均根据形态学、组织化学、流式细胞术和遗传学检查确诊。选择其中经标准诱导治疗(全反式维甲酸和三氧化二砷的联合化疗)获得完全缓解(CR)、有完整临床和实验室资料的30例患者进行MRD检测，自获得CR起2年内每3个月、2年后每6个月收集标本1次，共112份(42份治疗前APL骨髓标本，70份APL-CR骨髓标本)骨髓标本。

1.2 方法

1.2.1 标本处理及核酸制备 抽取患者骨髓液EDTA 抗凝，取 100 μl加入 300 μl Trizol，-80 ℃以下保存备用。总RNA采用Trizol-氯仿—异丙醇—乙醇提取，将抽提好的RNA加至60 μl RNAase-free水混匀溶解，立即进行检测或-80℃以下保存备用。主要试剂和仪器为白血病融合基因检测试剂盒(上海源奇生物医药科技有限公司)、ABI Prism荧光定量PCR检测系统(美国)、FACSCalibur流式细胞仪及主要单克隆抗体HLA-DR-FITC、CD117-PE、CD123-Percpcy5.5、CD34APC(美国 BD 公司)。

1.2.2 RQ-RT-PCR方法 每份标本利用 Taqman探针在ABI Prism荧光定量PCR检测系统上同时检测PML-RARα和ABL基因的表达。……