APP下载

黄鳝IRF-1和IRF-2保守序列的克隆与表达

2011-04-08顾琬雯许巧情李昊成袁汉文长江大学动物科学学院湖北荆州434025

长江大学学报(自科版) 2011年36期

顾琬雯,许巧情,宋 浪,李昊成,袁汉文 (长江大学动物科学学院,湖北荆州434025)

郝立平(湖北信息工程学校,湖北 荆门448124)

干扰素家族 (interferons,IFNs)是具有一系列多种功能的细胞因子,它们在抵抗病毒、调节细胞生长和调控免疫反应方面起着重要的作用。干扰素调节因子 (Interferon regulatory factors,IRFs)是在研究干扰素转录调控时发现的。迄今为止,在脊椎动物中共发现10种干扰素调节因子,即IRF-1~IRF-10。它们的主要作用是调节干扰素和干扰素诱导基因的表达[1]。此外,IRFs在造血细胞分化、免疫基因的调节中也发挥重要的作用[2],同时IRFs还参与Toll-like信号通路和其他的模式识别受体的免疫反应[3]。

鱼类作为一类非常重要的脊椎动物,对其免疫基因的研究有助于阐明其免疫机理和功能。目前,在鱼类中已经报道了几种IRFs的基因组结构和表达。例如IRF-1在虹鳟 (Oncorhynchusmykiss)[4]、大菱鲆 (Scophthalmusmaximus)[5]、鳜 (Sinipercachuatsi)[6],IRF-2 在虹鳟[4]和 鳜[7],IRF-3 在虹鳟[8],IRF-6在斑马鱼 (Daniorerio)[9],IRF-7在鳜[6]、虹鳟[8]和大西洋鲑 (Salmosalar)[10]中均有报道。而IRF-1和IRF-2在黄鳝 (Monopterusalbus)中尚未见任何报道。黄鳝集约化养殖程度大、种质资源退化、养殖水环境恶化,其病害的发生率愈来愈高,严重制约着黄鳝养殖业的发展,而加强对黄鳝免疫因子的研究可为黄鳝的疾病防治提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 材料

受试黄鳝来自长江大学黄鳝养殖基地,体重约100g,在实验室暂养2~3d后用于试验。

1.2 黄鳝RNA的提取及反转录

取新鲜的脾脏、中肾、肠等混合组织共100mg,迅速加入Trizol,冰上放置或冷冻于-80℃中。使用Trizol®Reagents提取黄鳝组织总RNA。然后参照Fermentas公司的RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit的方法合成cDNA,分装保存于-20℃中。

1.3 黄鳝IRF-1和IRF-2cDNA中间序列的……
登录APP查看全文