酶联免疫斑点检测技术的临床应用

2011-04-01张小飘综述明审校

重庆医学 2011年17期

关键词：检测

张小飘综述,聂明审校

(湖北省襄樊市第一人民医院检验科 441000）

酶联免疫斑点(enzyme-linked immunosorbent spot,ELISPOT)检测技术结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术的长处,能够分析经特异抗原活化后分泌细胞因子[如干扰素-γ(interferongamma,IFN-γ)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)等]的单个效应细胞的频数,具有敏感、特异、易于重复的优点[1],是检测抗原反应性效应细胞的最可靠实验方法之一[2],目前已成为抗原特异性T细胞免疫学研究的主流技术。本文就ELISPOT技术作如下综述。

1 ELISPOT技术的基本原理

ELISPOT培养板以二氟化树脂(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜等为基质,包被上特异性单克隆抗体,在培养板孔内加入细胞培养基、待检测的细胞及抗原刺激物进行培养。在特异性抗原或非特异性有丝分裂原的刺激下,T细胞分泌各种细胞因子,细胞因子被膜上的单克隆抗体捕获。被捕获的细胞因子可以与生物素标记的第二抗体结合,然后用酶标亲和素与生物素进行化学酶联显色,在膜的局部形成一个个圆形斑点[3]。

2 ELISPOT技术的优点

ELISPOT技术得到广泛应用,首先是由于其在检测抗原特异性细胞低频数时的高敏感性,比以流式细胞术为基础的技术(四聚体和细胞内细胞因子染色)的敏感性要高1～2个数量级;其次,ELISPOT技术可以利用冻存的外周血单个核细胞(peripheral b lood mononuclear cells,PBMC)样本来进行免疫监测分析而不丧失细胞的重要活性[4],同时计算机辅助图像分析系统的使用也使大规模研究成为可能。