张 雷，苏哲君，陈志宏

（承德医学院，河北承德 067000）

短篇报道

中药天年饮对衰老大鼠脾PCNA表达的影响

张 雷，苏哲君，陈志宏

（承德医学院，河北承德 067000）

衰老；脾；天年饮；PCNA

淋巴器官功能降低是免疫功能紊乱的主要原因，也与免疫功能的衰退密切相关[1]，因此，研究免疫系统的衰老变化具有重要的理论和实际意义。脾是机体重要的免疫器官，补肾、健脾是延缓衰老的主要方法。天年饮由刘河间《宣明论方》何首乌丸加味而成，能填精补髓、乌发延年。本研究采用D-半乳糖致亚急性衰老的大鼠模型，观察了中药天年饮对衰老大鼠脾形态结构和PCNA表达的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物的选择与分组 雄性SD大鼠30只，体重180-250g。将大鼠随机分为3组：正常组、衰老模型组和天年饮用药组，每组10只。模型组和用药组大鼠采用D-半乳糖连续腹腔注射(200mg/kg/d，40d）制作亚急性衰老的动物模型；模型组大鼠造模成功后不再做任何处理，用药组大鼠造模成功给予天年饮灌胃30d。

1.2 药品与试剂 天年饮由灸何首乌、怀牛膝、肉从蓉、淫羊藿、丹参、茯苓六味中药组成，煎制后每ml含生药1.5g，按16.2g/kg灌胃给药。PCNA免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。

1.3 免疫组化染色 大鼠断头处死，取脾入Bouins液固定，常规石蜡包埋，连续切片(片厚6μm）。采用SABC免疫组化染色观察大鼠脾PCNA的表达(PCNA一抗为小鼠抗，稀释浓度1：100），以细胞核出现棕黄色为阳性反应，以PBS代替一抗作为阴性对照。每只大鼠于显微镜下(10×20）任选5张切片，每张切片选取3个阳性细胞分布均匀的视野，采用MiVnt图像分析系统进行定量分析，以阳性产物面积占视野面积的比值作为PCNA的相对表达水平，取平均值。……