朱 丹，王 希，朱延明，陈 超，李 勇，柏 锡，才 华，纪 巍

（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030）

在基因的功能研究过程中，外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系，特别是对于真核细胞，蛋白质位于不同的细胞部位所行使的功能也不同，所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位，对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说具有很重要的意义。目前被广泛应用的能进行亚细胞定位的报告基因主要是绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）。绿色荧光蛋白是细胞生物学和分子生物学研究中的一个重要的工具，绿色荧光蛋白相对分子质量很小，能与多种不同的蛋白质N端或C端融合而保持其天然蛋白的特性，因此是一种直观性很强的遗传标记物[1-3]。通过与某单一序列的融合，可特异地进行细胞核、线粒体、质体、内质网等细胞器的定位。由于GFP基因其产物可以自身发光，不需要任何底物和辅助因子参与就能检测其活性，所以用GFP进行亚细胞定位，避免了提纯蛋白、标记异硫氰酸荧光素等荧光染料、经显微注射或其他方式导入细胞的复杂方法，从而使研究蛋白在活细胞的准确定位变得简单易行[4-6]。但在研究基因在植物细胞中的定位时，必须构建与基因融合的GFP亚细胞定位载体，常常会因酶切位点的难以选择使得构建周期长，操作复杂，如果能构建出具有多个可用酶切位点的植物表达载体卡盒，将大大缩短载体构建周期，节省大量人力物力[7-8]。……