冯建萍

检测鼠疫菌培养基的质量控制

冯建萍

鼠疫是人兽共患的烈性传染病。鼠疫疫源地证实,鼠疫疫情的判定是以分离到鼠疫菌为依据[1],而鼠疫菌分离的主要环节是培养基和基础液赫金格尔消化液的质量控制。本文对其制备、贮存、性能测试、影响因素、注意事项等方面应采取的质量控制进行讨论。

1 材料与方法

1.1 赫金格尔消化液制备

1.1.1 制作方法 取自来水5 000mL,加入绞碎去脂腱牦牛肉,煮沸30 min并不断搅拌。待冷却至56℃加入猪胰脏250 g,无水碳酸钠50～60 g,充分混匀矫正p H值为7.8,加入氯仿80～100 m L,冷却以橡皮塞紧塞瓶口,置于37℃温箱内消化7～9 d,每d振荡3～4次,消化良好时,上清液黄色透明,残渣沉于瓶底且甚少,保证氨基氮含量达到500～800 mg/L或更高。

1.1.2 氨基氮含量测定 根据每毫升N/10氢氧化钠滴定1.4 mg氨基氮的公式来计算,所得数字乘以100即为100 m L培养基内所含氨基氮的毫克数。

1.2 培养基制备 按每100 m L培基内含75 mg氨基氮的比例,用蒸馏水稀释消化液,并于其中加入氯化钠0.3%,磷酸氢二钠0.1%及琼脂粉2%,蛋白胨1%,加热溶解,矫正p H为7.0,121℃30 m in灭菌后倾注平皿即为胰酶消化液琼脂培养基[2]。

2 质量控制

2.1 保存

2.1.1 赫金格尔消化液保存 制备好的消化液用四层纱布,中间夹一层脱脂棉过滤到10 000 m L立形瓶中,并按每5 000 m L消化液加入80～100 m L氯仿,立即以橡皮塞紧塞瓶口,置室温避光,1个月左右,瓶底出现像石花菜絮状或结晶时,再进行过滤,测其氨基氮含量(索因森—格夫立洛氏测定法)达500～800 mg/L或更高即为合格,置室温阴暗处作为鼠疫菌培养基基础液备用[2]。

2.1.2 培养基保存 灭菌以后培养基应冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成份或选择性效果。……