郑其升，毕志香，李梅清，侯继波，陈溥言

1 国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014

2 山东省畜牧兽医职业学院，潍坊 261061

3 南京农业大学 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京 210095

随着DNA重组技术的发展和应用，疫苗研究正逐渐从传统的灭活和减毒疫苗向基因工程疫苗过渡，特别是以病毒和细菌为载体的重组活疫苗的研制，有望克服常规疫苗的一些弊端。但同时，重组病毒的安全性问题也越来越多地受到人们的关注[1]。在获得重组活载体疫苗后，一般随同目的基因转入载体的还有非目的基因，主要是抗性选择基因或报告基因。利用标记基因等可以从大量非转化细胞中将阳性重组克隆筛选出来，但随着重组病毒的传代，抗性选择基因变得不再有用，却仍在细胞内表达，这些基因也可能会进入环境中，产生安全性问题。因此，如果在获得重组活载体疫苗后，能除去这些非目的基因片段，可大大提高重组疫苗的安全性。

Cre/LoxP DNA重组系统具有位点特异、时期特异、组织特异和高效重组的特点，被广泛用于细菌、真菌、植物、昆虫和哺乳动物的体内、体外基因重组[2]。Cre和LoxP均来自于P1噬菌体，其介导因重组不需要其他蛋白质或辅助因子参与，仅需纳摩尔的量即可与LoxP位点结合，完成体内或体外的DNA重组，将外源基因定点整合到染色体上或将特定的DNA片段删除；Cre/LoxP重组系统在基因靶位操作、基因功能鉴定、外源基因整合等方面得到了广泛的应用，在转基因酵母、植物、昆虫、哺乳动物的体内外DNA重组方面成为有力的工具[3-4]。……