聂绪强，陈怀红，唐宁，卞卡,3,4

1 上海中医药大学穆拉德中药现代化研究中心，上海 201203

2 浙江大学医学院附属二院，杭州 310009

3 上海市教委一氧化氮和炎症医学E-研究院，上海 201203

4 美国德克萨斯大学休斯敦医学院综合生物及药理学系 德克萨斯大学分子医学研究所，休斯敦 TX77030

目前，组织工程与基因治疗研究较多的靶细胞是造血干细胞 (Hematopoietic stem cells，HSCs) 和骨髓间充质干细胞 (Bone mesenchymal stem cells，BMSCs)。这两种细胞都具备较强的体外增殖能力和分化能力。但它们主要分布在骨髓，由于成人骨髓量有限，而且抽取具有创伤及严重的并发症等，故其应用受到限制。自 Zuk等[1]首先报道成功分离培养人的脂肪干细胞以来，ADSCs逐渐成为各国科学家研究的热点。来源于人及各种动物的ADSCs的培养也各异。本文就ADSCs的药物化学诱导培养、共培养及其最新应用等方面作一综述。

1 ADSCs的来源及其标志

Zuk等[1]从人体脂肪组织中分离培养出成纤维样细胞群，能在体外稳定扩增，免疫荧光和流式细胞仪分析发现，这些细胞中大部分是中胚层，在一定条件下，可以向脂肪、软骨、肌肉和成骨细胞分化，称这些细胞为脂肪干细胞。细胞周期分析表明ADSCs G0/G1期79.1%，S期19.7%，G2/M期 1.3%，大部分细胞处于 G0/G1期，仅有少数细胞处于活跃的增殖期，说明只有机体受到损伤等应激情况时，ADSCs的自我更新方式才会发生变化。

有关 ADSCs特异性表面标志至今仍无统一认识，不同实验室研究结果不尽相同，这种差异可能与细胞分离、培养和纯化方法存在差异有关。流式细胞技术和免疫组织化学检测发现其中活化淋巴细胞粘附分子 (CD166)、血管细胞粘附分子 (CD106)、Thy21 (CD90)、5′-外切核酸酶 (CD73)、CD63、透明质酸盐 (CD44)、整合素 β1(C29) 等起初表达较低，随着传代其表达显著增加；而干细胞相关表面标志CD34的表达一直很高。ADSCs一般不表达E2选择素 (CD62)、神经细胞粘附分子 (CD56) 等[2-7]。如用这些标志对ADSCs进行有效分选，可以得到较纯的 ADSCs，将有助于对 ADSCs的进一步研究[8](表1)。

表1 ADSCs与BMSCs的表面标志比较[8-13]Table 1 Surface markers of ADSCs and BMSCs[8-13]

2 ADSCs的培养与分化

2.1 ADSCs的培养

ADSCs 可来源于人类、猴、犬、牛、猪、兔、豚鼠、大鼠、小鼠等，其培养方法大同小异。取腹股沟平行切下脂肪组织或吸脂手术的脂肪抽吸物，用PBS或者D-Hanks液冲洗，将脂肪组织剪成1 mm×1 mm×1 mm大小，加入0.1%的Ⅰ型胶原酶，37 ℃搅拌 40~60 min，1 000× g离心10 min，去上清，沉淀用PBS或者D-Hanks液洗，10%胎牛血清的DMEM (低糖，2 mmol/L谷氨酰胺，双抗)稀释，将细胞收集培养。24 h后换液，3 d换液1次，待细胞长满 80%用 0.25%胰酶消化传代培养

(图 1)[13,18-21]。

2.2 ADSCs的分化潜能

ADSCs具有多项分化潜能，在不同的药物及化学诱导剂条件下可以分化成成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等不同的细胞。如图 2、表 2所示。

图1 ADSCs的取材及培养步骤Fig. 1 Processing of lipoaspirate and isolation of adiposederived stem cells.

表2 ADSCs的分化诱导条件[13,20-25]Table 2 Conditions of ADSCs differentiated to special cell lineages[13,20-25]

图2 ADSCs多向分化潜能[14-17]Fig. 2 Multiple lineage differentiation potential of ADSCs. Under specific and controlled culture conditions, ADSCs can be induced to express the phenotypic characteristics of chondrocytes, osteoblast, adipocytes, or neurons, and so on[14-17].

3 ADSCs的共培养

3.1 ADSCs共培养介绍

ADSCs除了通过不同的药物化学物质进行体外诱导分化的方法外，也可以采用成熟体细胞或细胞支架与其共培养的方式诱导其定向分化。与试剂诱导相对，共培养方法亦称为生物诱导。通常采用的共培养方式有单层共培养 (Monolayer co-culture)、悬浮培养 (Suspension culture)、间接共培养 (亦称分层渗透培养) (Transwell) 细胞团块培养 (Cell pellet)、细胞层培养 (Cell sheet)、三维支架培养(Three-dimensional cell culture，TDCC)。其中单层培养、悬浮培养、间接共培养为二维培养，细胞团块培养、细胞层培养、三维细胞支架培养为三维培养(图3)。

3.2 ADSCs的二维培养

图3 细胞共培养模型示意图Fig. 3 Schematic diagram of cell co-culture model. (Ⅰ) A cell and B cell were co-cultured directly. (Ⅱ) A cell and B cell were co-cultured indirectly. (Ⅲ) Transwell chamber.

Zhang等[26]用新西兰大白兔的ADSCs与软骨细胞共培养，2周后成功地将ADSCs诱导成软骨样细胞。Cousin等[27]通过将 ADSCs与胰腺肿瘤细胞体外共培养，成功地利用 ADSCs介导的肿瘤细胞凋亡，并且在体内实验和体外实验都得到了证实，预测ADSCs可以作为治疗胰腺瘤的细胞替代疗法。张勇等[28]将ADSCs与病理状态下软骨细胞共培养后，ADSC可以被诱导成软骨样细胞，且发现高浓度血清三维培养可以增强这种诱导作用。Lei等[29]通过Transwell共培养的方法检测了 ADSCs对鼓膜成纤维细胞增殖的影响，通过Transwell细胞迁移实验检测ADSCs对鼓膜成纤维细胞迁移速度的影响，激光共聚焦显微镜下评估各项检测指标。结果发现ADSCs可能通过旁分泌作用促进鼓膜成纤维细胞增殖和迁移，将有利于鼓膜纤维层的修复，为ADSCs最终应用于临床治疗鼓膜穿孔提供了有意义的实验依据。Zhang等[30]将ADSCs与pcDNA3.0-FGF10 重组质粒转染人胚来源的 MSC (pcDNA3.0-FGF10-MSC) 共培养，将其分别种植在半透膜细胞培养池(Cell culture inserts) 多孔膜的外侧和内侧，通过监测转录因子C/EBP-α、C/EBP-β和PPAR-γ的表达情况以及裸鼠背部皮下混合注射ADSCs与pcDNA3.0-FGF10-MSC的体内实验来研究 FGF10的促成脂作用，结果发现随着共培养时间的延长，半透膜细胞培养池内的ADSCs形态逐渐发生变化，胞内脂滴随着时间的延长而增大、增多，对照组的ADSCs没有明显改变，油红O染色也得到进一步证实，通过共培养的方法第一次从功能获得的角度证明了 FGF10对ADSCs的促成熟作用。Li等[31]将ADSCs与血旺细胞 (Schwann cells，SCs) 通过Transwell共培养，用免疫分析、Western blotting、RT-PCR等分别检测ADSCs的形态、蛋白表达、基因等，发现 ADSCs与SCs共培养，SCs可以将其诱导向神经细胞分化，共培养7 d后开始显现，可以稳定保持 14 d。

3.3 ADSCs的三维培养

Tang等[32]用成年兔皮下脂肪分离培养脂肪干细胞，与自体脱钙骨基质复合后三维培养，细胞在脱钙骨基质表面和孔隙内黏附生长良好，并能继续增殖和分泌胞外基质。结果提示 ADSCs与脱钙骨基质复合后三维培养增殖良好。Hao等[33]利用Ⅰ型胶原凝胶均匀包埋 ADSCs后将其与聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙支架 (PLGA-β-TCP) 材料复合，以增加细胞在材料表面的附着，有效改善 ADSCs与支架材料的复合方式，并观察其异位成骨情况，结果发现通过应用Ⅰ型胶原凝胶来实现脂肪干细胞与PLGA-β-TCP多孔支架材料的均匀复合，能够有效促进 ADSCs在材料孔隙中的成骨分化及均质骨组织形成。Tian等[34]用 3月龄的日本大耳兔的ADSCs在体外壳聚糖-藻酸盐凝胶三维支架诱导培养下，成功分化成髓核样细胞，产生与髓核样细胞相同的胞外基质，且发现低氧状态下诱导效果较好。Nieto-Aguilar等[35]将人的ADSCs在三维新型纤维蛋白琼脂糖脚手架上进行诱导分化，用组织化学、免疫荧光分析等技术证明三维纤维蛋白琼脂糖生物材料与 ADSCs有高度的生物相容性，完全能够支持ADSCs向软骨、成骨、成脂、神经系分化。

4 ADSCs的应用

4.1 ADSCs在动物模型上的应用

ADSCs在各疾病动物模型上用来干预治疗糖尿病、肝脏损伤修复、膀胱重建、2型糖尿病阳痿、心肌梗死、脑梗、认知功能障碍、中风、椎间盘修复、胶质母细胞瘤治疗、骨缺损、创伤后血管新生、风湿性关节炎、肌腱修复、唇腭裂、心力衰竭、结肠炎、尿失禁等[36-48]。

4.1.1 ADSCs在心血管疾病动物模型中的应用

西班牙学者Perán等[38]首次将ADSCs转变为心肌细胞，既重新编程了成熟的干细胞，又能改善心脏病的治疗。Zhang等[39]将ADSCs与纤维蛋白胶复合后注射到心肌梗塞大鼠的左心室壁上，术后4周就发现大鼠的心脏功能相较于单独使用 ADSCs组的大鼠有明显提高 (P＜0.01)，提示联合ADSCs与纤维蛋白胶复合在临床组织工程治疗心肌梗塞上会有很大的前景。

4.1.2 ADSCs在组织工程动物疾病模型中的应用

McIntosh等[40]利用ADSCs促进大鼠脊柱融合，Zhu等[41]用 ADSCs接种到兔膀胱无细胞基质(Bladder acellular matrix grafts，BAMGs) 中，24周后各种指标数据表明成功地实现了兔膀胱的重建。Cui等[42]将ADSCs作为种子细胞放于网状支架中，成功地修复了狗的颅骨损伤，为临床治疗颅骨损伤提供了新的途径，Jing等[43]提出可以利用 ADSCs的骨分化特性来完整地修复牙齿，免除老年人牙齿缺失之苦。

4.1.3 ADSCs在代谢性疾病动物模型中的应用

Ohmura等[44]将ADSCs和胰岛细胞一起移植到1型糖尿病C57BL/6J小鼠中，结果显示胰岛细胞的存活率及其分泌胰岛素的功能都大大提高。Lin等[45]将人或大鼠的ADSCs移植到1型糖尿病大鼠模型的肾小囊内后，实验动物出现血糖降低、葡萄糖耐量提高、皮肤光滑、白内障减少等表现，故表达胰十二指肠同源盒基因-1 (Pancreatic duodenal homeobox 1 gene，Pdx1) 的ADSCs可用于治疗糖尿病。

4.1.4 ADSCs在勃起功能障碍疾病动物模型中的应用

美国加州大学医学院的Garcia等[46]向肥胖的2型糖尿病 ZDF阳痿大鼠阴茎中注射大鼠自体的ADSCs，注射3周后就发现ADSCs能够很好地存活，阴茎背根内神经源型一氧化氮合酶 (Neuronal nitric oxide synthase，nNOS) 也明显增加，并且明显改善了糖尿病阳痿大鼠的勃起功能障碍，预测ADSCs用来治疗糖尿病阳痿是一种很有前景的疗法。Huang等[47]将 ADSCs注射入高脂血症大鼠(Hyperlipidemic rats，HR) 阴茎海绵体后，其nNOS的表达及海绵体压力 (Intracavernous pressure，ICP)都较对照组高。Albersen等[48]也证明ADSCs能有效改善神经性勃起功能障碍 (Neurogenic erectile dysfunction，NED) 大鼠的阴茎勃起情况。

4.2 ADSCs在临床上的应用

目前，ADSCs除了在各个动物模型上的应用取得了一定的成效，而且已经开始在临床上大量应用于组织工程、心血管疾病、代谢性疾病、脑病[49-58]等 (表3)。

4.2.1 ADSCs在临床心血管疾病上的应用

来自荷兰埃拉斯莫斯大学的杜克斯博士的科研小组[51]把心脏病人腹部脂肪的 ADSCs注射进他们的心脏以后，减少了心脏的损伤、同时也增加了血流，干细胞注射进心脏以后经过 6个月，病人心脏接受带氧血液的能力提高，心脏左心室送出的血液也增加了3.5倍，SPECT显像证明接受ADSCs注射的病人心泵的能力增加了5.7%，核磁扫描也显示患者的平均心肌疤痕面积由原来的 31.6%下降到15.4%，这一研究成果发布在2010年美国心脏协会科学年会上。

4.2.2 ADSCs在临床组织工程上的应用

ADSCs在组织修复过程中可以调节周围组织中的生长激素和细胞因子如VEGF，ICG-1等防治细胞凋亡[52]，Kim等[53-54]也证明ADSCs可以分泌各种皮肤生长因子如纤维细胞生长因子 (Basic fibroblast growth factor，bFGF) 等来促进成纤维细胞繁殖，并具有抗光老化、抗氧化、抗皱、抗紫外辐射等作用。Garcia-Olmo等[55]研究小组用ADSCs来治疗病人复杂性肛瘘已经进入到Ⅱ期临床实验。Yoshimura等[56]用人的ADSCs移植入15名乳房萎缩、大小不一或需要隆胸的患者乳房中，3D检查显示ADSCs的存活率达到40%~80%，12个月后，左右乳房大小均衡对称，乳房X光检测，被修复的乳房自然柔软完全无钙化，无囊肿现象，无明显的注射疤痕。

表3 ADSCs目前的临床研究Table 3 Ongoing human clinical trials of adipose-derived stem cells

续表3

4.2.3 ADSCs在临床代谢性疾病上的应用

最近的临床研究显示[57]，肌内注射ADSCs对糖尿病足和闭塞性动脉硬化症也有一定的疗效。在注射ADSCs的6个月后，从临床上看，患者的静息疼痛得到了缓解，无痛行走的距离明显延长，而且并未发现任何并发症。Vanikar等[58]将ADSCs诱导成胰岛样细胞移植入11名 (7名男性，4名女性)持续患有 1~24年不等的糖尿病患者中，术后随访23个月，发现患者的外源性胰岛素用量从以前的1.14 units/(kg BW·d) 下降到0.63 units/(kg BW·d)，HbA1c也从8.47%下降到7.39%，平均血清C-肽从0.1 pg/L增加到0.37 pg/L，患者的平均体重增加了2.5 kg，而且患者无不适或副反应。

5 问题及前景展望

ADSCs最大的一个优点便是含量丰富。实验表明吸脂手术吸取的每 100 mL的脂肪组织中，ADSCs 的数量相当于等量骨髓中 BMSCs的 40倍，且成纤维细胞集落形成单位 (Colony-forming unit-fibroblast，CFU-F) 试验中表明，ADSCs中干细胞数目至少是骨髓的500多倍[59-60]，而且ADSCs比其他的干细胞分化时间要短，是目前生长最快的干细胞[61]。随着肥胖症患者的增多，人类脂肪开始“富余”，并渐成为累赘。临床上脂肪抽吸术后脂肪组织大多丢弃，造成了宝贵干细胞的大量浪费。手术废弃物组织再造再利用，说明ADSCs又是一个廉价的干细胞来源。ADSCs有可能成为一种廉价、可大量获得的自体干细胞，同时不存在医学伦理学和免疫排斥等问题。

目前，美国斯坦福大学的Sun等[62]研究人员在ADSCs和皮肤成纤维细胞中分别加入能够编码4种转录因子的基因 (Oct4、Sox2、Klf4、c-MYC) 后，约有万分之一的皮肤成纤维细胞转变为多功能干细胞 (Induced pluripotent stem cells，iPS)，而转变为iPS细胞的脂肪干细胞比例达到千分之二，是前者的20倍。利用脂肪干细胞培育的iPS细胞也通过了有关测试，它们能够分化成人体内的神经细胞、肌肉细胞以及肠上皮细胞等，而且所转变的 iPS细胞安全性更高，将来有望利用ADSCs培育人体所需的各种器官。

但是 ADSCs的研究甚至整个干细胞的研究目前都存在以下一些问题：1) 尚无法直接鉴定。常用的鉴定方法都是通过体外诱导多向分化，然后逆推之，才能得知是否为相应的干细胞；2) ADSCs移植后，在体内的迁移、转归不清楚。我们以前的研究[63-64]表明，炎症期间一些细胞趋化因子具有使全身白细胞游走并迁移到创伤小鼠的创面，一氧化氮凝胶可以显著促进皮肤干细胞的形成。那么，ADSCs移植后，是否也具有类似炎症细胞的趋向迁移性？中医中药是我国的瑰宝，是否也有相关的中药或中药制剂能够促进 ADSCs的形成与表达？ADSCs与中药或中药制剂对一些疾病的治疗是否具有协同作用？中药或中药制剂能否提高 ADSCs的靶向性和有效性？3) 特异性标志物。不同的研究，不同的来源，不同的分化，ADSCs的标志物不同，因此亟需找到 ADSCs的特异性标志物。4) 目前国内外ADSCs的研究主要在体外和动物体内进行，如何将ADSCs的研究从实验动物走向人体，且ADSCs培养条件是一种优化过的环境，经过这样培养的ADSCs移植入人体后能否适应体内环境并保持强势增长，ADSCs在实验动物和人体内的生长诱导环境是否相同，如果相异，相异点在哪里？这些都值得进一步地研究探讨。

总之，随着生物化学、材料化学、分子生物学、细胞生物学等的发展，ADSCs与体细胞共培养，诱导 ADSCs定向分化已成为确实可行有研究前景的技术，相信对 ADSCs共培养技术及机制的深入研究，将会模拟建立更为真实的生物体微环境培养系，应用于ADSCs的分化诱导，为组织工程、再生医学以及各种人类疾病提供种子细胞。

REFERENCES

[1] Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng, 2001, 7(2): 211−228.

[2] Gwak SJ, Bhang SH, Yang HS, et al. In vitro cardiomyogenic differentiation of adipose-derived stromal cells using transforming growth factor-betal. Cell Biochem Funct, 2009, 27(3): 148−154.

[3] Yang YI, Kim HI, Choi MY, et al. Ex vivo organ culture of adipose tissue for in situ mobilization of adipose-derived stem cells and defining the stem cell niche. J Cell Physiol, 2010, 224(3): 807−816.

[4] Im W, Lee ST, Park JE, et al. Transplantation of patient-derived adipose stem cells in YAC128 Huntington's disease transgenic mice. PLoS Curr, 2010, 2: pii: RRN1183.

[5] Gronthos S, Zannettino AC. Methods for the purification and characterization of human adipose-derived stem cells. Methods Mol Biol, 2011, 702: 109−120.

[6] Ho JH, Ma WH, Tseng TC, et al. Isolation and characterization of multi-potent stem cells from human orbital fat tissues. Tissue Eng Part A, 2011, 17(1/2): 255−266.

[7] Valentina F, Emilia M, Marinella T, et al. Purification and characterization of adipose-derived stem cells from patients with lipoaspirate transplant. Cell Transplant, 2010, 19(10): 1225−1235.

[8] Hanson AD, Marvel SW, Bernacki SH, et al. Osteogenic effects of rest inserted and continuous cyclic tensile strain on hASC lines with disparate osteo differentiation capabilities. Ann Biomed Eng, 2009, 37(5): 955−965.

[9] de Villiers JA, Houreld N, Abrahamse H. Adipose derived stem cells and smooth muscle cells: implications for regenerative medicine. Stem Cell Rev, 2009, 5(3): 256−265.

[10] Tapp H, Hanley EN, Patt JC, et al. Adipose-derived stem cells: characterization and current application in orthopaedic tissue repair. Exp Biol Med, 2009, 234(1): 1−9.

[11] Lindroos, B, Boucher, S, Chase, L, et al. Serum-free, xeno-free culture media maintain the proliferation rate and multipotentiality of adipose stem cells in vitro. Cytotherapy, 2009, 11(7): 958−972.

[12] Lindroos B, Suuronen R, Miettinen S. The potential of adipose stem cells in regenerative medicine. Stem Cell Rev, 2010, [Epub ahead of print].

[13] Freshney RI, Stacey GN, Auerbach JM (write). Zhang JB, Chen SP (translate). Culture of Human Stem Cells. Beijing: Science Press, 2009.弗雷谢尼 RI, 斯泰赛 GN, 奥尔贝奇 JM (著). 章静波,陈实平等 (译). 人干细胞培养. 北京: 科学出版社, 2009.

[14] Wu SC, Chang JK, Wang CK, et al. Enhancement of chondrogenesis of human adipose derived stem cells in a hyaluronan-enriched microenvironment. Biomaterials, 2010, 31(4): 631−640.

[15] Rigol M, Solanes N, Farré J, et al. Effects of adipose tissue-derived stem cell therapy after myocardial infarction: impact of the route of administration. J Card Fail, 2010, 16(4): 357−366.

[16] Tsagias N, Kouzi-Koliakos K, Koliakos I, et al. Addition of adipose-derived stem cells in cord blood cultures stimulates their pluripotent differentiation. Transplantation Proc, 2009, 41(10): 4340−4344.

[17] Xie LW, Fang H, Chen AM, et al. Differentiation of rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells towards a nucleus pulposus-like phenotype in vitro. Chin J Traumatol, 2009, 12(2): 98−103.

[18] Ning HX, Liu G, Lin GT, et al. Identification of an aberrant cell line among human adipose tissue-derived stem cells isolates. Differentiation, 2009, 77(2): 172−180.

[19] Ni YW, Zhou YS, Liu YS, et al. Comparison of biological characteristics of human, rabbit and rat adipose tissue-derived stromal cells in vitro. J Peking Uni (Health Science), 2009, 41(1): 95−99.

[20] Bunnell BA, Flaat M, Gagliardi C, et al. Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation. Methods, 2008, 45(2): 115−120.

[21] Ren Y, Wu HQ, Ma YZ, et al. Isolation, cultivation and identification of adipose-derived stem cell in bovines. Chin J Biotech, 2010, 26(12): 1645−1651.任宇, 吴海青, 马玉珍, 等. 牛脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定. 生物工程学报, 2010, 26(12): 1645−1651.

[22] Cui L, Wu YH, Cen L, et al. Repair of articular cartilage defect in non-weight bearing areas using adipose derived stem cells loaded polyglycolic acid mesh. Biomaterials, 2009, 30(14): 2683−2693.

[23] Conrad C, Niess H, Huss R, et al. Multipotent mesenchymal stem cells acquire a lymphendothelial phenotype and enhance lymphatic regeneration in vivo. Circulation, 2009, 119(2): 281−289.

[24] Vieira NM, Brandalise V, Zucconi E, et al. Human multipotent adipose-derived stem cells restore dystrophin expression of Duchenne skeletal-muscle cells in vivo. Biol Cell, 2008, 100(4): 231−241.

[25] Wang EY. Isolation, culture and induction of cardiomyocyte phenotype from rat adipose-derived stem cells in vitro[D]. Yangling: Northwest A&F University, 2009.王二云. 大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及向心肌细胞诱导分化的研究[D]. 杨凌: 西北农林科技大学, 2009.

[26] Zhang Y, Zhao JN, Han NB. Co-culture of adipose derived stem cells and chondrocytes. J Clinical Rehab Tissue Eng Res, 2009, 13(24): 4632−4636.

[27] Cousin B, Ravet E, Poglio S, et al. Adult stromal cells derived from human adipose tissue provoke pancreatic cancer cell death both in vitro and in vivo. PLoS One, 2009, 4(7): e6278.

[28] Zhang Y, Zhao JN, Han NB. Research of adipose derived stem cells and chondrocytes in different culture condition. Orthopedic J Chin, 2009, 17(10): 782−785.张勇, 赵建宁, 韩宁波. 不同培养条件下脂肪干细胞与软骨细胞共培养的研究. 中国矫形外科杂志, 2009, 17(10): 782−785.

[29] Lei F, Sun JJ, Liu Y, et al. Effects of in vitro cultured adipose-derived stem cells of rats on the tympanic membrane fibroblasts. Chin J Otorhinolaryngol Head Neck Surg, 2010, 45(7): 587−591.

[30] Zhang XY, Wu MJ, Zhang WW, et al. Differentiation of human adipose-derived stem cells induced by recombinantly expressed fibroblast growth factor 10 in vitro and in vivo. In Vitro Cell Dev Biol Anim, 2010, 46(1): 60−71.

[31] Li XJ, Liao DP, Gong P, et al. Neural differentiation of adipose-derived stem cells by indirect co-culture with schwann cells. Arch Biol Sci, 2009, 61(4): 703−711.

[32] Tang SF, Li CC, Liu CX. Three-dimensional culture of adipose-derived stem cells combined with demineralized bone matrix scaffolds. J Clinical Rehab Tissue Eng Res, 2010, 14(12): 2101−2105.

[33] Hao W, Jiang M, Qian SQ, et al. Fabrication and ectopic bone formation of a novel bone tissue engineering construct by using collagen Ⅰgel to suspend adipose-derived stem cells into a porous PLGA-β-TCP scaffold. Chin J Exp Surg, 2008, 25(6): 691−693.

[34] Tian HQ, Li F. Differentiation of adipose-derived stem cells towards nucleus pulposus-like cells induced by three-dimensional scaffold in vitro. J Clinical Rehab Tissue Eng Res, 2009, 13(38): 7417−7421.

[35] Nieto-Aguilar R, Serrato D, Garzon I, et al. Pluripotential differentiation capability of human adipose-derived stem cells in a novel fibrin-agarose scaffold. J Biomater Appl, 2010.

[36] Zuk PA. The adipose-dervied stem cell: looking back and looking ahead. Mol Biol Cell, 2010, 21(11): 1783−1787.

[37] Tran TT, Kahn CR. Transplantation of adipose tissue and stem cells: role in metabolism and disease. Nat Rev Endocrlnol, 2010, 6(4): 195−213.

[38] Perán M, Marchal JA, López E, et al. Human cardiac tissue induces transdifferentiation of adult stem cells towards cardiomyocytes. Cytotherapy, 2010, 12(3): 332−337.

[39] Zhang X, Wang H, Ma X, et al. Preservation of the cardiac function in infarcted rat hearts by the transplantation of adipose-derived stem cells with injectable fibrin scaffolds. Exp Biol Med (Maywood), 2010, 235(12): 1505−1515.

[40] McIntosh KR, Lopez MJ, Borneman JN, et al. Immunogenicity of allogeneic adipose-derived stem cells in a rat spinal fusion model. Tissue Eng Part A, 2009, 15(9): 2677−2686.

[41] Zhu WD, Xu YM, Feng C, et al. Bladder reconstruction with adipose-derived stem cell-seeded bladder acellular matrix grafts improve morphology composition. World J Urol, 2010, 28(4): 493−498.

[42] Cui L, Liu B, Liu GP, et al. Repair of cranial bone defects with adipose derived stem cells and coral scaffold in a canine model. Biomaterials, 2007, 28(36): 5477−5486.

[43] Jing W, Wu L, Lin YF, et al. Odontogenic differentiation of adipose-derived stem cells for tooth regeneration: necessity, possibility, and strategy. Med Hypotheses, 2008, 70(3): 540−542.

[44] Yoshiaki O, Masahiro T, Naomasa K, et al. Combined transplantation of pancreatic islets and adipose tissue-derived stem cells enhances the survival and insulin function of islet grafts in diabetic mice. Transplantation, 2010, 90(12): 1366−1373.

[45] Lin GT, Wang GF, Liu G, et al. Treatment of type 1 diabetes with adipose tissue-derived stem cells expressing pancreatic duodenal homeobox 1. Stem Cells Dev, 2009, 18(10): 1399−1406.

[46] Garcia MM, Fandel TM, Lin G, et al. Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells. J Sex Med, 2010, 7(1 Pt 1): 89−98.

[47] Huang YC, Ning HX, Shindel AW, et al. The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model. J Sex Med, 2010, 7(4 Pt 1): 1391−1400.

[48] Albersen M, Fandel TM, Lin GT, et al. Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury. J Sex Med, 2010, 7(10): 3331−3340.

[49] Mizuno H. Adipose-derived stem cells for tissue repair and regeneration: ten years of research and a literature review. J Nippon Med Sch, 2009, 76(2): 56−66.

[50] Guilak F, Estes BT, Diekman BO, et al. 2010 Nicolas Andry Award: multipotent adult stem cells from adipose tissue for musculoskeletal tissue engineering. Clin Orthop Relat Res, 2010, 468(9): 2530−2540.

[51] Laino C. Study shows fat stem cells may improve heart function after heart attack[EB/OL]. [2011-01-06]. http:// www.webmd.com/heart-disease/news/20101116/belly-fatstem-cells-may-help-heart.

[52] Zhu M, Zhou ZY, Chen Y, et al. Supplementation of Fat Grafts With Adipose-Derived Regenerative Cells Improves Long-Term Graft Retention. Ann Plast Surg, 2010, 64(2): 222−228.

[53] Kim WS, Park BS, Park SH, et al. Antiwrinkle effect of adipose-derived stem cell: activation of dermal fibroblast by secretory factors. J Dermatol Sci, 2009, 53(2): 96−102.

[54] Kim WS, Park BS, Sung JH. Protective role of adiposederived stem cells and their soluble factors in photoaging. Arch Dermatol Res, 2009, 301(5): 329−336.

[55] Garcia-Olmo D, Herreros D, Pascual I, et al. Expanded adipose-derived stem cells for the treatment of complex perianal fistula: a phase II clinical trial. Dis Colon Rectum, 2009, 52(1): 79−86.

[56] Yoshimura K, Asano Y, Aoi N, et al. Progenitor-enriched adipose tissue transplantation as rescue for breast implant complications. Breast J, 2010, 16(2): 169−175.

[57] Hong SJ, Traktuev DO, March KL. Therapeutic potential of adipose-derived stem cells in vascular growth and tissue repair. Curr Opin Organ Transplant, 2010, 15(1): 86−91.

[58] Vanikar AV, Dave SD, Thakkar UG, et al. Cotransplantation of adipose tissue-derived insulin-secreting mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells: a novel therapy for insulin-dependent diabetes mellitus. Stem Cells Int, 2010: 582382.

[59] Fraser JK, Wulur I, Alfonso Z, et al. Fat tissue: an under-appreciated source of stem cells for biotechnology. Trends Biotechnol, 2006, 24(4): 150−154.

[60] Fraser JK, Zhu M, Wulur I, et al. aAdipose-derived stem cells. Methods Mol Biol, 2008, 449(1): 59−67.

[61] Brayfield C, Marra K, Rubin JP. Adipose stem cells for soft tissue regeneration. Handchir Mikrochir Plast Chir, 2010, 42(2): 124−128.

[62] Sun N, Panetta NJ, Gupta DM, et al. Feeder-free derivation of induced pluripotent stem cells from adult human adipose stem cells. Proc Natl Acad Sci USA, 2009, 106(37): 15720−15725.

[63] Zhu HF, Ka B, Murad F. Nitric oxide accelerates the recovery from burn wounds. World J Surg, 2007, 31(4): 624−631.

[64] Zhu HF, Wei XF, Bian K, et al. Effects of nitric oxide on skin burn wound healing. J Burn Care Res, 2008, 29(5): 804−814.