APP下载

宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用

2011-01-31刘丽琴浙江省中西医结合医院杭州310003吕北京中医药大学

浙江中西医结合杂志 2011年1期
关键词:方组宣肺血凝

刘丽琴 胡 旭 浙江省中西医结合医院 杭州 310003吕 华 北京中医药大学

宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用

刘丽琴 胡 旭 浙江省中西医结合医院 杭州 310003吕 华 北京中医药大学

目的:观察宣肺和解方对流感病毒感染小鼠的保护作用。方法:取体重为17~18g的NIH小鼠分为正常对照组、感染模型组、宣肺和解方组和病毒唑组。以流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠,致病毒性肺炎模型。应用宣肺和解方进行防治,以病毒唑注射液为对照。结果:在观察的时间内,与模型组比较,宣肺和解方可以显著降低流感病毒感染小鼠的死亡率(P<0.05),显著延长平均生存时间(P<0.05),显著降低肺指数(P<0.05),以及显著降低肺匀浆中病毒血凝滴度(P<0.05);各组小鼠体重也有显著性差异(P<0.05)。结论:宣肺和解方可有效抑制病毒性肺炎小鼠体内病毒增殖,降低肺指数,提高存活率。

小鼠 流感病毒 病毒性肺炎 宣肺和解方

宣肺和解方由麻杏石甘汤合小柴胡汤加减组成,是临床用于流感样疾病的经验方,可用于流感流行季节具有发热、咽痛、咳嗽等症状患者的防治。为了进一步研究其防治呼吸道感染的作用机制,我们进行了宣肺和解方抗小鼠呼吸道流感病毒感染的研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 NIH小鼠112只,清洁级,雌雄各半,体重17g~18g,由北京生物制品研究所提供(医动字第01-3071号),置于实验动物洁净柜中饲养。

1.2 病毒及药物 SPF鸡胚,购自北京生物制品研究所。流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1),中国预防医学院病毒所提供,实验室液氮保存。病毒复苏后在鸡胚中传代两次,小鼠LD50为10-5.11,血凝滴度1∶256。宣肺和解方由炙麻黄、炒杏仁各9g,生石膏30g,生甘草6g,柴胡、黄芩、连翘、牛蒡子各15g,知母10g组成。上方药物经药学鉴定后,确定工艺,制备成实验研究用的口服制剂,含生药0.4g/mL。病毒唑注射液,100mg/mL,由江苏扬州制药厂生产(批号:20030915),用时以无菌生理盐水配制成2mg/mL,0.05g/(kg·d)。

1.3 死亡保护实验 小鼠雌雄各半,随机分为四组,每组20只。正常对照组、感染模型组和宣肺和解方组均提前4天灌胃,每次灌胃0.5mL,1天2次,其中正常对照组、感染模型组以生理盐水灌胃;宣肺和解方组以宣肺和解口服液灌胃。第5天除正常对照组外,另三组灌胃后感染FM1,以乙醚轻度麻醉小鼠后,以50μL流感病毒液滴鼻,感染剂量为30 LD50。正常对照组以生理盐水50μL滴鼻。感染后再灌胃7天。病毒唑组在感染FM1后30min给药,每次腹腔注射病毒唑0.5mL,1天2次,共给药6天。记录不同时间的小鼠体重,逐日观察动物发病症状,记录死亡时间和死亡数。直至感染后14天。死亡保护率(%)=感染模型组死亡率-药物治疗组死亡率。

1.4 肺指数及病毒血凝滴度测定 小鼠分组、感染、给药方法同上,每组8只。肺指数测定:在流感病毒感染后第4天,按文献方法测定。肺指数=小鼠肺重/小鼠体重×100%。肺悬液病毒血凝滴度测定:分别取各组肺置匀浆器中加生理盐水(肺重(g)/生理盐水(mL)=1/9),研磨制成匀浆,4℃,2500 rpm,离心30min,取上清按文献方法作微量病毒血凝试验,计算滴度[1]。

1.5 统计学方法 计数资料用χ2检验。计量资料用方差分析,组间比较用q检验。

2 结 果

2.1 FM1感染对小鼠行为的影响 正常对照组小鼠精神良好,行动敏捷有力,毛发有光泽,呼吸正常,体肥。感染模型组感染24小时后出现甩头、呼吸逐日加快、短促,以腹式呼吸为主,行动迟缓无力,蜷缩、怕冷、毛发无光泽,食少消瘦,饮水量明显降低,这种状态在一直持续4天左右。第5天感染病毒的小鼠陆续出现死亡,直至第9天左右达到高峰,出现大量死亡,以感染模型组为最。从第10天起,各感染病毒组,小鼠活动逐渐增加,饮食量接近正常对照组,体重开始缓慢增长,状态恢复。14天后,各组均不再有死亡,除体重有差异外,小鼠饮食与活动无差别。病毒唑组、宣肺和解方组与感染模型组比较,活动与摄食减少的症状相对较轻。

2.2 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用宣肺和解方可以延长FM1感染小鼠生存时间,降低死亡率,同感染模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用(±s)

表1 宣肺和解方对FM1感染小鼠的死亡保护作用(±s)

注:与感染模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组平均存活时间/天>14 9.7±3.2 13.2±2.2△△11.4±3.1△n/只20 20 20 20死亡数/只0 16 4 8死亡保护率/% --死亡率/% 0 80.0 20.0△40.0△60.0 40.0

2.3 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影 FM1感染可以导致小鼠体重明显下降,至感染第9天,平均体重比感染前降低。宣肺和解方组可以一定程度地抑制FM1感染导致的体重下降,同感染模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。病毒唑虽然有明显的抗病毒作用,但也不能完全阻止小鼠FM1感染导致的体重下降,见表2。

表2 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影响(±s)

表2 宣肺和解方对FM1感染小鼠体重的影响(±s)

注:与感染模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组n/只20 20 20 20感染前7天17.8±0.8 17.8±1.0 17.9±0.7 17.9±0.6感染第9天22.9±0.9△△14.8±2.4 18.7±2.9△17.3±2.7△

2.4 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数病毒血凝滴度的影响 宣肺和解方组可以降低FM1感染小鼠的肺指数和肺悬液病毒血凝滴度,同感染模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数和病毒血凝滴度的影响(± s)

表3 宣肺和解方对FM1感染小鼠肺指数和病毒血凝滴度的影响(± s)

注:与感染模型组比较,△P<0.05,△△P<0.01

组别正常对照组感染模型组病毒唑组宣肺和解方组血凝滴度(lnX)0 5.16±0.58 3.33±0.53△△4.31±0.77△n/只8 8 8 8肺指数(%)0.864±0.081△△1.271±0.189 0.971±0.159△△1.050±0.140△

3 讨论

实验研究表明,小柴胡汤及麻杏石甘汤均有良好的抗流感病毒的作用[2-3]。但是,不是所有具有解表作用的方药均有抗病毒作用,例如小青龙汤可以抑制流感病毒感染小鼠的病毒复制,抑制病毒从鼻向肺传播,增加支气管肺泡灌冼液中IgA抗体含量;而组方与小青龙汤部分相似的葛根汤在同样条件下,无抗流感病毒活性[4],其机制尚待进一步研究。本研究所采用的宣肺和解方,即是由麻杏石甘汤合小柴胡汤加减组成,可以显著降低流感病毒感染小鼠的死亡率,延长平均生存时间。实验结果显示,宣肺和解方对小鼠FM1感染所致病毒性肺炎的程度和肺内的病毒复制,具有一定的抑制作用,对流感病毒感染小鼠有一定的保护作用。

中药复方抗流感病毒具有成分复杂、多作用靶点的特点。不同配方的中药,抗流感病毒免疫机制不尽相同,有的是改善非特异性免疫,有的是改善血清免疫球蛋白水平,有的则作用于T淋巴细胞亚群、调节细胞因子(如IFN、IL、TNF)合成和释放,这些研究对深入阐述中药调节机体抗病毒免疫的机制提供了依据。

[1]傅继华.病毒学实用实验技术[M].济南:山东科学技术出版社,2001:53-59.

[2]袁长津,卢芳国,朱应武.小柴胡汤及其加减方体外抗流感病毒的实验研究[J].中华中医药杂志,2006,2l(1):4l-42.

[3]张仲海,王胜春,王汝娟,等.麻杏石甘汤不同方法提取液对发热模型及抗病毒作用的影响[J].第四军医大学学报,2007, 18(6):522-524.

[4]胡旭,邱全瑛.中医药抗呼吸道流感病毒感染实验研究概况[J].中国中医药信息杂志,2004,11(2):180-182.

Antiviral Effect of Chinese Herbal Medicine Xuan-fei-he-jie Formula on Influenza Virus Infection in Mice

LIU Liqin,HU Xu,LV hua.Zhejiang Provincial Hospital of the Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, Hangzhou(310003),China

Objective:To study the effect of Chinese herbal medicine Xuan-fei-he-jie Formula on the treatment of influenza virus infection in mice.MethodsPulmonary inflammation model was established in mice by nasal drop of influenza virus.The effect of prophylaxis and treatment with Xuan-fei-he-jie Formula was investigated in the mice with influenza virus infection.Ribavirin served as control.ResultsIn the Xuan-fei-he-jie Formula group,the survival rate of infected mice was significantly increased than that in the model group(P<0.05),with a prolonged survival time(P<0.05). Both the lung index and viral titers were decreased in the Xuan-fei-he-jie Formula group than those in the model group(P<0.05).The mouse body weight was significant different in the 2 groups(P<0.05).ConclusionXuan-fei-he-jie Formula can effectively inhibit the proliferation of influenza virus,decrease lung index,promote survival rate in mice infected by influenza virus.

influenza Virus respiratory tract infection mouse

2010-07-05

猜你喜欢

方组宣肺血凝
奥美拉唑、血凝酶联合生长抑素治疗上消化道出血的效果
6例蛇毒血凝酶致低纤维蛋白原血症的报道
宣肺通腑方加减对肠缺血/再灌注肺损伤导致的急性肺损伤大鼠抗炎、抗氧化作用∗
活血益气方促缺氧人脐静脉内皮细胞迁移及其相关调控基因mRNA表达的拆方研究
交泰丸治疗失眠症的疗效研究
祛痰、化瘀和祛痰化瘀方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞增殖及凋亡功能的影响❋
宣肺止嗽合剂辅助治疗咳嗽变异性哮喘的风邪犯肺证患者
祛风宣肺止咳方治疗风痰闭阻型感染后咳嗽30例临床观察
全自动血凝分析仪采用2种测定血浆纤维蛋白原方法的评价
尖吻腹蛇血凝酶在鼻中隔偏曲矫正术中止血疗效及安全性观察