□楚雄州动物疫病预防控制中心 675000 杨冬月

□楚雄州农产品质量检测中心 675000 虞继权

按照《云南省测土配方施肥暨地力评价技术》一书检测土壤有效磷，配制的一系列标准溶液中，最高浓度是0.50ug.ml-1，此浓度相对应的吸光度值是0.2，而依据相关资料证明，当标准曲线吸光度范围是0.2～0.8（透射比为15%～65%）时，在此范围中测定的样品浓度相对误差较小。为此，可采用的方法之一是调节标准溶液的浓度。根据《云南省测土配方施肥暨地力评价技术培训教材》、《化验员读本仪器分析》，证实显色剂的用量影响标准溶液浓度，而且显色剂的用量与标准溶液浓度之间的关系可通过实验确定。鉴于此，所做的实验分两步，第一步：配制一组磷含量是1.0ug.ml-1，而显色剂含量不同的溶液，显色剂的含量从低到高，依次增加，测定这组溶液的吸光度。根据吸光度—浓度之间的关系，在一定的浓度值之间（此处浓度值指显色剂的浓度）吸光度出现稳定值，与这个稳定的吸光度值相对应的显色剂的量就是实验需确定的数据，它是配制标准溶液浓度达1.0ug.ml-1时所需添加的显色剂的量。第二步：为了比较在标准曲线中加入第一步试验得出的显色剂的量后所检测的样品结果，与按照《云南省测土配方施肥暨地力评价技术培训教材》一书配制的标准曲线检测的样品结果是否一致，从第一步试验中选定一个在范围内的显色剂的用量，配制成一组磷浓度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的标准曲线，检测样品，记录吸光度值，再按照教材配制一组磷浓度是0.0ug.ml-1到0.5ug.ml-1的标准曲线，检测同一个样品，记录吸光度值，判定两个吸光度值是否一致，从而进一步验证磷浓度是0.0ug.ml-1到1.0ug.ml-1的标准曲线中所添加的显色剂的量是否正确。

1 材料与方法

1.1 材料

1）磷标准溶液[C（P）=100mg.L-1]。称取经105℃下烘干2h的磷酸二氢钾（优级纯）0.4390g，用水溶解后，加入5ml浓硫酸，定容至1L。

2）5mg.L-1磷标准溶液。吸取5.00ml浓度为100mg.L-1的磷标准贮备液于100ml容量瓶中，定容。

3）钼锑抗显色剂。称取1.50g抗坏血酸（分析纯），溶于100ml7.5mol.L-1硫酸钼锑贮备液中。

4）7.5mol.L-1硫酸钼锑贮备液。取蒸馏水约400ml，烧杯浸在冷水内，然后缓缓注入分析纯浓硫酸208.3ml，并不断搅拌，冷却至室温。另取分析纯钼酸铵20g溶于约60℃的200ml蒸馏水中，冷却。然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌再加入100ml酒石酸锑钾溶液（浓度是0.5%），用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。

5）分析天平。感量0.0001g。

6）分光光度计。可在660nm下测定吸光度，北京普析TU1901双光束紫外分光光度计。

1.2 方法

1）磷含量是1.0ug.ml-1，显色剂含量不同的各溶液吸光度的测定。分别吸取5mg.L-1磷标准溶液10.00ml于八个50ml的容量瓶中，依次加入钒钼酸铵显色剂 0ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、14ml，充分摇动逐尽 CO2后用水定容，即为含磷是1.0ug.ml-1，含显色剂浓度不同的一组溶液，在室温高于20℃处放置30min后，用1cm光径比色皿在波长660nm处测定吸光度。

2）样品的制备。吸取5mg.L-1的磷标准溶液5ml于50ml的容量瓶中，加入显色剂5.00ml，充分摇动逐尽CO2后用水定容，作为待测样品。

3）浓度最高点1.0ug.ml-1的标准曲线的绘制：吸取50mg.L-1磷标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于 50ml容量瓶中，各加入显色剂10ml，充分摇动逐尽CO2后用水定容，即为含磷 0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1磷标准系列溶液，在室温高于20℃处放置30min后，用1cm光径比色皿在波长660nm处比色测定经过2）条处理的样品浓度。

4）浓度最高点是0.5ug.ml-1标准曲线的绘制：按照《云南省测土配方施肥暨地力评价技术培训教材》操作，吸取5mg.L-1磷标准溶液 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于 50ml容量瓶中，各加入显色剂5.00ml，充分摇动逐尽 CO2后用水定容，即为含磷0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ug.ml-1磷标准系列溶液，在室温高于20℃处放置30min后，用1cm光径比色皿在波长660nm处比色测定经2）条处理的样品浓度。

2 结果与分析

1）磷的浓度值是 1.00ug.ml-1，加入 8ml、10ml、12ml显色剂的溶液测得的吸光度值分别是0.470、0.467、0.467，根据紫外分光光度计光度准确度是±0.004Abs（0.5～1.0Abs），这三个值可以看作是相同。检测结果见表1。所以当标准曲线的最高浓度值是1.00ug.ml-1时，加入 8ml、10ml或 12ml的显色剂，检测结果都相同。为了节省试剂用量，为了移液方便、快速，确定显色剂用量是10ml。

表1 浓度是1.00ug.ml-1溶液加入不同量显色剂的吸光度

2）按照3）条检测样品，结果浓度是0.466ug.ml-1，另外按照4）条检测同一个样品，结果浓度是0.465ug.ml-1，两个检测值可视为相同。所以，配制含磷浓度是0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ug.ml-1的标准曲线，各溶液加入10ml显色剂，这个标准曲线中测定的样品与按《云南省测土配方施肥暨地力评价技术培训教材》测定的同一个样品比较，结果相同。在实际检测中，按照3）条配制的标准曲线适用可行。

3 讨论

1）由于各地方的土壤含磷量不同，不同类型的土壤含磷也不同，在检测中，可适度调整检测磷的标准曲线的浓度，继而相应调整显色剂的含量。

2）在检测过程中，如果样品的颜色比标准曲线中1.0ug.ml-1的溶液颜色深，则可用目测法把样品先作适当稀释，直到稀释的样品颜色浅于1.0ug.ml-1的溶液颜色时，用紫外分光光度计测定。但是在稀释过程中，建议将样品移至容量瓶内稀释，提高检测的准确度。

3）在此实验中，进行样品处理时，为了减少误差，采用了样品处理与标准曲线配制相同的方法。但在实际检测中，样品的处理方法应按标准执行。

4 结论

1）土壤有效磷的检测中，在标准曲线磷含量浓度达1.0ug.ml-1的情况下，每50ml的溶液中加入8～12ml显色剂，各溶液检测到的吸光度相同，即在实际检测中可用的显色剂的量是 8～12ml。

2）配制磷浓度最高达1.0ug.ml-1，显色剂是每50ml的溶液加入10ml的标准曲线，在此标准曲线中检测样品，结果准确、可靠，这个标准曲线的配制方法可在实际检测中运用。

[1]窦晓黎，等.云南省测土配方暨地力评价技术培训教材.

[2]刘珍，等.化验员读本[M].北京:化学工业出版社，1983.

[3]北京普析通用仪器有限责任公司编.Uvwin5使用指南.