王 巍,张晓希,刘新光

(广东医学院:1.临床血液检验学教研室;2.检验医学研究所,东莞 523808;3.中国人民解放军第四二二医院,广东湛江 524023)

两种常用转染试剂转染siRNA至HL-60细胞转染效率的比较*

王 巍1,张晓希3,刘新光2△

(广东医学院:1.临床血液检验学教研室;2.检验医学研究所,东莞 523808;3.中国人民解放军第四二二医院,广东湛江 524023)

目的比较两种常用转染试剂转染小干扰RNA(siRNA)至悬浮细胞的转染效率及对细胞毒性的影响。方法以羧基荧光素(FAM)标记的siRNA为报告基因,以lipofectamine 2000和siPORT NeoFX为转染试剂,用流式细胞仪检测转染效率,倒置显微镜观察细胞形态,M TT法检测细胞存活率。结果siRNA＞100 nmol/L时,lipofectamine 2000的转染效率高于siPORT NeoFX(P＜0.05);siRNA＜100 nmol/L时,前者低于后者(P＜0.05)。siRNA终浓度及转染试剂用量相同时,lipofectamine 2000组HL-60细胞存活率与SiPORT NeoFX组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论在使用高浓度siRNA时,lipofectamine 2000对HL-60细胞有较高的转染效率和较小细胞毒性。

脂质体;转染;RNA,小分子干扰

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象[1-3]。目前,该技术已经成为研究基因功能的有力工具,同时也为肿瘤的治疗提供了新的思路[4]。转染试剂的选择及转染条件的优化对于利用RNAi介导的基因沉默实验来说至关重要。脂质体是常用的转染试剂,lipofectamine 2000为广谱转染试剂,对DNA和RNA均可有效转染[5-8],较为经典。siPORT NeoFX为近几年才出现的小干扰RNA(siRNA)专用转染工具。本文从转染效率和细胞毒性两方面研究上述两种转染试剂介导化学合成siRNA转染HL-60细胞的转染效果,旨在为siRNA转染悬浮细胞转染试剂的选择提供帮助。……