杨 锦 邹斌斌 张玉祥 王泽生

(首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系)

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)参与调控细胞代谢、增生、迁移和分化。其过度表达可加速细胞分裂与增生，抑制凋亡，有助于血管形成，并促进癌细胞转移［1］。人类肿瘤包括非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈癌、胃癌、结肠癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、口腔癌等都可表达或高表达EGFR［2］。肿瘤中的EGFR表达与疾病侵袭性增强、化疗抵抗增加、转移性增强，生存率下降及临床预后差相关［3］。

egfr基因5'调控区包括1个富含GC的启动子，缺少保守序列TATA盒和CAAT盒，有多个位点可以起始转录［4］。egfr启动子在－216G/T存在多态性并与其增加活性相关［5］。深入了解egfr基因在肿瘤内的表达调控将有助于我们对该基因的表达进行干预，并治疗相应肿瘤。进行这类研究需要大规模、多样本的基因组重测序。尽管第二代测序成本已明显降低，但全基因组重测序需要大量的时间和高额的成本，制约其应用于疾病研究。基因组目标区域重测序策略不需对全基因组进行测序，只对基因或其他感兴趣的基因组区域的基因序列重新测定。国际上已发表的研究报告［6－7］均采用商业公司推出的目标序列捕获解决方案。本研究以宫颈癌细胞系HeLa S3 egfr启动子为模型，建立了一套简便易行的RNA捕获靶序列的富集体系，结合Solexa测序方法，为各种复杂人类疾病相关突变的检测奠定良好基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1)细胞株:宫颈癌细胞系HeLa S3(购于北京协和细胞库)。……