冯建萍,金 星,李 翔,杨晓艳,任玲玲,张青雯,祁芝珍,戴瑞霞,魏绍振,金丽霞,熊浩明,赵子婧

赫氏培养基不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响

冯建萍,金 星,李 翔,杨晓艳,任玲玲,张青雯,祁芝珍,戴瑞霞,魏绍振,金丽霞,熊浩明,赵子婧

目的 探讨不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响观察。方法同批次消化液不同含量(120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L)氨基氮作为基础消化液制备的赫氏琼脂培养基(指100mL培养基内所含的氨基氮)进行活菌数实验,寻找出适宜鼠疫菌生长的最佳氨基氮。结果通过反复实验发现6种不同氨基氮含量对鼠疫菌生长影响中170mg/L含量的赫氏培养基优于其它5种氨基氮含量培养基,经统计学分析有差异(P<0.05)。结论鼠疫菌生长的最佳氨基氮含量为170mg/L。

赫氏培养基;氨基氮;鼠疫菌

细菌在生长发育过程中需要一定的营养,最主要的是氨基酸、糖和金属离子,国内鼠疫实验室常用的基础培养基有肉浸液琼脂,其中以胰酶消化液为优[2]。本所制备的基础培养基为赫氏消化液,可用于鼠疫菌分离、纯化、判定等,其氨基氮含量在700～1000m g/L,按每100m L培养基内含75m g氨基氮的比例[1],鼠疫菌生长良好[3],但氨基氮含量多少才是鼠疫菌最适生长的温床,国内外未曾报道,为此,本试验通过6种不同氨基氮含量的培养基,筛选鼠疫菌生长的最佳氨基氮。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 氯化钠,天津市化学试剂批发公司;磷酸氢二钠,天津市凯通化学试剂有限公司;琼脂粉,北京欣经科生物技术有限公司;蛋白胨(英国进口);赫氏消化液,由青海省地方病预防控制所制备。1.1.2 菌株 EV76巴黎株,鼠疫强毒标准141株,由鼠疫菌专业实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 赫金格尔消化液制备 量取自来水5 000m L置白瓷桶内,加入绞碎去脂腱的牦牛肉,煮沸30min并随时搅拌。待冷却至56℃时加入猪胰脏250g,无水碳酸钠70g,测其p H值为7.8,加入三氯甲烷80～100mL,冷却以橡皮塞紧塞瓶口,置于37℃温箱内消化7～9d,每日振荡3～4次,消化良好时,上清液黄色透明,残渣沉于瓶底且甚少,氨基氮500～800mg/L或更高。

1.2.2 氨基氮含量测定 根据每毫升N/10氢氧化钠滴定1.4毫克氨基氮的公式来计算,所得的数字乘以100即为每100m L培养基内所含氨基氮的毫克数[1]。本次试验所用氨基氮含量在820m g/L在所需范围之内。

1.2.3 赫金格尔培养基制备 选取6种氨基氮含量即 120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L(指每100m L中所含的氨基氮消化液),称取氯化钠0.3%、磷酸氢二钠0.1%、琼脂粉2%、蛋白胨1%,按6种不同氨基氮量加入相应消化液和蒸馏水(每种总量分别为1000mL,8磅15m in,测p H7.0,15磅30m in高压灭菌,加 10%脱纤维兔溶血10m L,混匀,倾注平皿,放入37℃温箱24h无菌生长方可使用)。

1.2.4 活菌数测定 取 EV76和鼠疫强毒标准株141 28℃24h斜面培养物按常规稀释法稀释,用生理盐水比浊成7亿/m L,使鼠疫菌悬液最终浓度为1000个菌/m L,取制备好的6种不同氨基氮含量培养基平皿各10个,分成两组,一组为 EV76的菌悬液,一组为鼠疫强毒菌141菌悬液,每组各为5个平皿,分别接种菌悬液0.1m L,用L棒涂抹均匀,28℃48h培养后计算菌落数,经检查(检测)批数12批,每批各5个平皿,每种氨基氮含量的培养基平皿数为60个。

2 结 果

2.1 赫氏培养基不同氨基氮含量对EV76生长影响的观察 表 1显示 170mg/L的赫氏培养基与120m g/L、150m g/L、200mg/L 、250mg/L、300mg/L对鼠疫菌生长的影响,经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05)。

2.2 赫氏培养基不同氨基氮含量对鼠疫菌141生长影响的观察 表2显示,170mg/L的赫氏培养基与 120mg/L、150mg/L、200mg/L 、250mg/L、300mg/L对鼠疫菌生长的影响,经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05)。

表1 不同氨基氮含量对EV76 Paris株生长影响的观察Table 1 Observed Hershey medium with different contents of am ino nitrogen

表2 赫氏培养基不同氨基氮含量对强毒菌141生长影响的观察Table 2 The observed Hershey medium with different contents of am ino

3 讨 论

鼠疫的判定是以分离鼠疫菌为依据的,培养基是分离鼠疫菌的基本条件之一,在鼠疫病原检验中发挥着重要作用,其成分和质量直接影响鼠疫菌的生长、繁殖和分离[4]。国内实验室常用的基础培养基有肉浸液琼脂,其中以胰酶消化液为优。细菌在生长过程中需要一定的营养,最主要的是氨基酸、糖和金属离子。所以消化液氨基氮含量的高低直接影响培养基的质量,每批消化液氨基氮范围需达到500～800mg/L或更高,即每100mL培养基内含75mg氨基氮的比例,但究其鼠疫菌生长的最佳氨基氮,目前国内外还未曾报到,我们选取了6种剂量组的不同氨基氮即 120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L进行了反复试验,经统计学分析(t检验)有差异(P<0.05),表明170mg/L的消化液鼠疫菌生长优于其它5种氨基氮。由此得出结论鼠疫菌生长的氨基氮需有一定的范围,含量过高或过低都会影响其生长。这就消除了以前误认为只要氨基氮含量越高其鼠疫菌生长就越好的误区,因此,只有寻找适宜的氨基氮含量才是鼠疫菌生长的最有利条件。通过该实验筛选出170mg/L是鼠疫菌生长的最适氨基氮。

[1]朱锦沁.鼠疫细菌学讲义[M].西宁:青海省地方病防治研究所,1983,111-114.

[2]纪树立.鼠疫[M].北京,人民卫生出版社,1988:255.

[3]席亚芳,于兰香,赵凤梅,等.中国地方病防治杂志[J].1995,10[6]:342.

[4]席亚芳,冯建萍,金星,等.赫氏干燥培养基的研究和制备[J].医学动物防治,2006,22(10):719-720.

Different am ino n itrogen contents on the growth of Yersinia pestis in Herxheimer medium

FENGJian-ping,JIN Xin,L IXiang,YANG Xiao-yan,REN Lin-lin,ZHANGQing-wen,Q IZhi-zhen,DA IRui-xia,W EIShao-zhen,JIN Li-xia,XIONG Hao-m ing,ZHAO Zi-jing

(Qinghai Institute for Endemic D isease Control and Research,Xining 811602,China)

In order to research the different amino nitrogen contents on the grow th of Y.S,the same batch of digestive juice but different amounts(120mg/L,150mg/L,170mg/L,200mg/L,250mg/L and 300mg/L)of amino nitrogen were used as a basic digestive juice to conduct a few experiments to look for the best one for suitable grow th of Y.S.Through the experiment,it was found that the 170mg/L was bestmedium in the six different amino nitrogen contentson the grow th of Y.S.Results reveal the differences in the statistical analysis(P<0.05)and the best amino nitrogen content for grow th of Y.S of is 170mg/L.

Herxheimer medium;amino nitrogen;Yersinia pestis

R378.6

A

1002-2694(2011)07-0647-02

青海省地方病预防控制所,西宁 811602;

Email:fjp6286350@163.com

2010-11-09;

2011-01-28