徐 荔，何小鹃，柴 旺，鞠大宏，吕爱平，喻长远△

(1.北京化工大学，北京 100029;2.中国中医科学院中医临床基础医学研究所，北京 100700;3.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

黄芪是常用的“扶正固本，补益中气”药物，其化学成分复杂，含有多糖、多种皂甙、黄酮以及氨基酸、亚油酸、生物碱等。其中黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide，APS)是黄芪中含量最多、免疫活性最强的一类物质，具有增强机体免疫、扩张冠状动脉、改善心脏功能、增强抗氧化能力、防止脂质过氧化、改善肾脏功能、防止肝糖原减少、抗衰老等多种功能及药理功效[1～3]。本实验以人单核巨噬细胞系U937细胞为研究对象，采用体外培养方法，观察黄芪多糖对LPS诱导的U937细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及一氧化氮(NO)的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

U937细胞(购自北京协和医院基础医学研究所细胞中心);RPMI1640培养基(美国Gibcol公司);胎牛血清(美国Gibcol公司);双抗(美国Sigma公司);脂多糖(lipoplysaccharide，LPS)(美国Sigma公司);佛波酯(Phorbolmyristateacetate，PMA)(美国Sigma公司);Human TNF-α Instant ELISA，Human IL-1β Instant ELISA试剂盒(美国eBioscience公司);Griess Reagent System试剂盒(美国Promega公司);黄芪多糖(天津赛诺制药有限公司，批号081201)。

1.2 仪器

CO2培养箱(美国Thermo公司);倒置相差显微镜(日本Olympus公司);酶标分析仪(美国Thermo公司);以上均为中国中医科学院中医基础理论研究所仪器。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 U937细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，于37℃，5%CO2培养箱中静置培养。

1.3.2 ELISA检测TNF-α、IL-1β含量 选对数生长期的U937细胞，用RPMI1640完全培养基调整细胞浓度至4×105/ml接种于24孔板，每孔1ml，加PMA诱导48h成熟后，吸弃全部上清液，实验组每孔加入1ml LPS(1μg/ml)，另设对照组加入1ml RPMI1640培养基，置于37℃5%CO2的培养箱中作用1h后，实验组加入不同浓度的APS 200μl，使其终浓度为37.5μg/ml～150μg/ml，不加APS的LPS组及对照组每孔加入200μl PBS，置37℃5%CO2培养箱继续培养。……