苏敬泽，林 谦，农一兵

(1.北京市宣武区中医医院，北京 100050;2.北京中医药大学东方医院，北京 100078)

循环血中和/或心肌局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是引起心肌细胞肥大的最重要活性物质[1～3]，而能量代谢障碍是心肌肥厚和充血性心力衰竭重要的推动因素之一，贯穿在心肌肥厚发生、发展的全过程中，是导致心肌肥厚发展为心衰的重要因素[4]。既往研究表明，黄芪对心衰、缺血缺氧、再灌注损伤和病毒损伤的心肌，具有保护心肌线粒体结构、提高生物氧化相关的多种酶的活性、减少乳酸脱氢酶外漏等作用，从而改善心肌能量代谢[5～7]。我们在血管紧张素Ⅱ致乳鼠心肌细胞肥大模型基础上，选用黄芪注射液(主要成分为黄芪皂苷)和注射用黄芪多糖，观察其对心肌细胞ATP含量的影响，旨在探讨黄芪组分对心肌细胞能量代谢的干预作用，为中药防治心衰提供实验依据。

1 材料

1.1 动物与主要试剂

Wistar大鼠由中国医学科学院实验动物中心提供;血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)，Sigma Inc;络沙坦(losartan)，Merck Research Laboratories;黄芪注射液，成都地奥九泓制药厂，10ml/支(批号0410027);注射用黄芪多糖，美国泛华医药公司，250mg/支(批号8k01101);Trypsin，SigmaInc;CollagenaseⅡ，GibcoInc;Dulbecco’sModified Eagle’s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham，Sigma Inc;胎牛血清(特级)，杭州四季青生物工程材料有限公司;5-Bromo-2’-Deoxyuridind(Brd-u)，Sigma Inc;小鼠α－横纹肌动蛋白单克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司;RNAgents Total RNA Isolation system，Promega;Access Quick RT-PCR System，Promega。

1.2 仪器

P4000高效液相色谱仪，UV6000二级管阵列检测器，ChromQuest分析软件，美国TSP公司Olympus IX71+制冷摄像头倒置荧光显微镜;SHEL-LAB 2323 CO2培养箱;再鑫CLASS 100超净台。

2 方法

2.1 心肌细胞培养与鉴定

利用乳大鼠培养心肌细胞的方法最早由Harary报道[8]，本实验以Harary的方法为基础，同时参考其他研究者的经验，将出生1d～3d的Wistar大鼠(雌雄不拘)在无菌条件下取出心脏，将心脏剪成1mm3大小的组织块，胰酶、胶原酶混合消化液，于37℃水浴振荡分次消化，直至组织块完全消化。……