周 鑫 刘伟强 孙海龙

(黑龙江林业职业技术学院，黑龙江 牡丹江 157011)

花叶万年青(DieffenbachiapictaLodd)，又名黛粉叶，天南星科花叶万年青属植物。原产南美巴西，为常绿灌木状草本，茎干粗壮多肉质，株高可达1.5m，叶片大而光亮，着生于茎干上部，椭圆状卵圆形或宽披针形，全缘，长20～50cm、宽5～15cm，叶片两面深绿色，其上镶嵌着密集、不规则的白色、乳白、淡黄色等色彩不一的斑点，花单性，佛焰花序，佛焰苞呈椭圆形。花叶万年青色彩明亮，四季青翠，枝繁叶茂，充满生机，优美高雅，极耐荫，特别适合在现代建筑中配置，是目前备受推崇的室内观叶植物之一，深受人们的喜爱，市场需求量很大。花叶万年青常规繁殖采用分株和扦插繁殖，年繁殖系数低，一般在5～20倍。组织培养工厂化育苗可在短期内获得大量无病虫害、优质苗木，满足市场需求。

1 材料与方法

1.1 实验材料选取与处理

选取幼叶叶柄为外植体材料。采集外植体材料用自来水冲洗，用70%乙醇消毒5～10s，倾去乙醇，用无菌水冲洗。在超净工作台上用0.1%的氯化汞溶液浸泡6min后，注入适量的无菌水，反复冲洗8遍，每次3min，用无菌纱布吸干水分，无菌接种到培养基上。

1.2 试验方法

1.2.1 最佳诱导培养基选择实验

将外植体接种在MS为基本培养基，细胞分裂素BA或KT，浓度分别为5.0mg/L、4.0mg/L、3.0mg/L、2.0mg/L、1.0mg/L，生长素NAA或IBA，浓度分别为1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L的培养基上培养。根据生长情况选择适宜的生长调节剂和最佳诱导培养基。

1.2.2 最佳增殖培养基选择实验

根据诱导实验选择适宜的生长调节剂，进行增殖培养基实验，将诱导成功的0.5cm×0.5cm的材料接种在以MS为基本培养基，BA浓度分别为3.0mg/L、2.0mg/L、1.0mg/L，NAA浓度分别为1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L的培养基上培养。根据生长情况选择最佳增殖培养基。

1.2.3 最佳生根培养基选择实验

将2cm以上芽接种到生根培养基，以1/2MS为基本培养基，生长素选用NAA，浓度分别2.0mg/L、1.0mg/L、0.5mg/L、0.1mg/L，细胞分裂素BA，浓度分别为0.5mg/L、0.3mg/L、0.1mg/L。根据生长情况选择最佳生根培养基。

2 结果与分析

2.1 最佳诱导培养基选择实验结果

外植体培养4周后统计生长情况见表1。细胞分裂素BA5.0mg/L时，植物表现生长调节剂过高现象，BA4.0mg/L时，配合适当的生长素浓度(NAA0.5mg/L)产生大量愈伤组织，BA3.0mg/L，配合适当的生长素浓度(NAA0.1mg/L)形成大量丛生芽，BA2.0mg/L时，都能形成丛生芽，BA1.0mg/L时表现出细胞分裂素不足，表明细胞分裂素BA对花叶万年青诱导作用明显；添加KT培养基外植体无显著变化，KT对植物生长影响不显著，对花叶万年青无诱导作用。不同浓度NAA下，外植体形成愈伤组织、丛生芽，说明NAA作用明显；不同浓度IBA下，外植体变化不明显，说明IBA对外植体影响作用不显著。

综合生长情况见表1、表2，工厂化育苗最佳诱导培养基为MS+BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L。

表1外植体诱导生长情况

续表

培养基不同生长素浓度生长情况1．0mg/L0．5mg/L0．1mg/LMS+BA4．0mg/L+IBA部分愈伤组织粗厚、卷曲部分愈伤组织粗厚、卷曲部分愈伤组织粗厚、卷曲MS+KT4．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈伤组织外植体膨大外植体无反应MS+KT4．0mg/L+IBA外植体无反应外植体无反应外植体无反应MS+BA3．0mg/L+NAA部分愈伤组织粗厚、卷曲形成丛生芽和愈伤组织形成丛生芽MS+BA3．0mg/L+IBA形成少量丛生芽形成少量丛生芽形成少量丛生芽MS+KT3．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈伤组织外植体膨大外植体无反应MS+KT3．0mg/L+IBA外植体无反应外植体无反应外植体无反应MS+BA2．0mg/L+NAA形成丛生芽形成丛生芽形成丛生芽MS+BA2．0mg/L+IBA形成丛生芽形成丛生芽形成丛生芽MS+KT2．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈伤组织外植体膨大愈伤组织MS+KT2．0mg/L+IBA外植体无反应外植体无反应外植体无反应MS+BA1．0mg/L+NAA形成少量愈伤组织、生长缓慢形成少量愈伤组织、生长缓慢外植体无反应MS+BA1．0mg/L+IBA外植体无反应外植体无反应外植体无反应MS+KT1．0mg/L+NAA膨大、突起，有少量愈伤组织外植体膨大外植体无反应MS+KT1．0mg/L+IBA外植体无反应外植体无反应外植体无反应

表2不同培养基平均形成丛生芽数量统计表

2.2 最佳增值培养基选择实验结果

诱导材料在不同增殖培养基生长4周后统计芽增殖数量，结果见表3。经过SPSS统计分析，进行主体间效应的检验，见表4。方差齐次性检验表明：BA与NAA组合，Sig=0.043，小于0.05，方差不齐次性显著，说明不同BA与NAA组合培养基芽增殖差异显著。5号培养基芽增殖数量最多(见图1)，增值最佳培养基选择MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。

表3不同培养基的芽增殖数

表4主体间效应的检验

2.3 生根培养基选择实验结果

增殖苗转接到生根培养基培养，4周后统计生根率结果见表5、图2。NAA浓度0.5～1.0mg/L，配合BA浓度0～0.3mg/L都能生根，生根率20.9%～94.8%，最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+BA0.1mg/L，生根率为94.8%。

表5生长调节剂浓度对生根率的影响 单位：%

3 结论

细胞分裂素BA、生长素NAA对花叶万年青生长作用明显。花叶万年青工厂化育苗诱导最佳培养基MS+BA3mg/L+NAA0.5mg/L，增殖培养最佳培养基MS+BA2mg/L+NAA0.5mg/L，生根最佳培养基1/2MS+NAA0.5mg/L+BA0.1mg/L，生根率94.8%。

[1]谭文澄，戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社，1991.

[2]陈世昌，等.植物组织培养[M].重庆：重庆大学出版社，2006.

[3]韦三立.花卉组织培养[M].北京：中国林业出版社，2001.