武军华，魏文清，贾培媛，赵宇，王晨宇，刘晶，王玉霞

(1.军事医学科学院毒物药物研究所军事毒理及生化药理研究室，北京100850;2.北京军区总医院，北京100700)

肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析

武军华1*，魏文清2*，贾培媛1，赵宇1，王晨宇1，刘晶2，王玉霞1

(1.军事医学科学院毒物药物研究所军事毒理及生化药理研究室，北京100850;2.北京军区总医院，北京100700)

目的制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体。方法应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原，采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白;ELISA测定抗体滴度。纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231〔p53(mutant)〕和〔H1299，p53(null)〕肿瘤细胞系，Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性。结果对筛选到的3株单克隆抗体1P15，2P37和3P40，进行了亲和层析技术纯化。SDS-PAGE结果显示，纯化后的3株抗体纯度均在90%以上;ELISA滴度测定结果显示，3株单抗的滴度均在1∶6000以上。免疫印迹结果表明，3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度，其中3P40的灵敏度最高，可以达到5 ng。Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示，抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性，说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白，而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时，没有非特异性结合。结论成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体，其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳。

肿瘤抑制蛋白质P53;单克隆抗体;酶联免疫吸附分析

大量研究表明，肿瘤抑制蛋白质P53参与了包括生长［1］、发育［2］、增殖［3］、衰老［4］和凋亡［5］等众多的生理病理过程。……