杨胜乾，龙隆，李微，王莉莉

(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)

mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响

杨胜乾，龙隆，李微，王莉莉

(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)

目的构建激酶盘真核表达载体，观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术，将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上，构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体。将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后，采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像，分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度。结果质粒酶切和测序鉴定表明，构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确。载体转染细胞24 h后，绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核，发生核转位现象。c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生。结论成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc。载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能。

巨噬细胞集落刺激因子受体;真核表达载体;TEL;豆蔻酰化;信号转导和转录激活因子;核转位;激酶抑制剂

激酶是细胞内一类最重要的功能蛋白，在细胞信号通路的调节过程中发挥着重要的作用。激酶组学(kinomics)的最新研究表明，人类共有518种激酶［1］。大量研究表明，酪氨酸激酶不仅在细胞之间和细胞内部信号传递、协调细胞分裂等复杂过程发挥着重要的作用，还与癌症、心血管疾病［2］、糖尿病［3］、类风湿性关节炎［4］等疾病也密切相关。……