马芳，熊华伟，贾小芳，姚亚敏，刘晓茜，张丽军，3

(1.上海市公共卫生临床中心科学研究部，上海201508;2.南昌大学生命科学与食品工程学院生物科学系，江西南昌330031;3.中南大学临床药理研究所，湖南长沙410083)

依非韦伦的肝细胞毒性作用及对蛋白质表达谱的影响

马芳1，熊华伟2，贾小芳1，姚亚敏1，刘晓茜1，张丽军1，3

(1.上海市公共卫生临床中心科学研究部，上海201508;2.南昌大学生命科学与食品工程学院生物科学系，江西南昌330031;3.中南大学临床药理研究所，湖南长沙410083)

目的探讨依非韦伦对肝细胞的毒性作用及对蛋白质表达谱的影响。方法人肝癌细胞系Huh7中分别加入依非韦伦1.25，2.5，5和10 mg·L－1，培养5 h后采用原位比色法测定细胞内活性氧类(ROS)的含量;依非韦伦2.5 mg·L－1与细胞作用5 h后，用膜联蛋白-Ⅴ/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒染色。用流式细胞仪测定细胞凋亡;依非韦伦2.5 mg·L－1处理细胞5 h，获得全细胞蛋白质进行二维凝胶电泳，采用Image Master软件分析差异蛋白质点，应用纳升级液相色谱串联电喷雾离子阱质谱进行差异蛋白质鉴定。结果随着依非韦伦浓度的增加，细胞内ROS的含量逐步升高(r=0.9740，P＜0.05)。依非韦伦2.5 mg·L－1与细胞作用5 h后，与正常对照组比较，细胞凋亡百分率无显著变化，但有7种蛋白质表达量显著降低，其中线粒体热激蛋白75和抗氧化蛋白1的表达量分别降低了76.7%和85.5%;抗胰蛋白酶及其S突变体、细胞角蛋白9、剪接体相关蛋白和磷酸丙糖异构酶的表达被完全抑制。结论依非韦伦对Huh7细胞具有明显的细胞毒性，可能通过调节热激蛋白75和抗氧化蛋白1等的表达影响线粒体的功能，最终导致肝毒性的发生。……