张大川，付云洁，刘志国，梁莉甜，李 琦

(武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北武汉430023)

免疫球蛋白作为一类重要的免疫效应分子，是由高等动物免疫系统产生的蛋白质，通过抗原诱导可转化为抗体。其中，IgG是存在于血液、淋巴、腹腔液中的主要免疫球蛋白，但它的存在介质中含有非常复杂的混合物，为了消除杂蛋白干扰，获得纯度较高的IgG，本实验采用辛酸硫酸铵及亲和层析两种方法对血清进行纯化，并从纯度、蛋白质含量、抗体效价等方面比较两种方法的纯化效果，为今后的抗体纯化提供一种高效实用的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

试剂：辛酸、硫酸胺、环氧氯丙烷，分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司;Sepharose 4B，北京鼎国生物技术有限公司;戊二醛，分析纯，国药集团生物技术有限公司。

仪器：奥地利SUNRISE酶标仪;天美8500紫外扫描仪;北京六一DYY-5型电泳仪;Kodak 1D凝胶成像系统;科力生化培养箱。

1.2 方法

1.2.1 苏丹红I多克隆抗体的制备

按照常规程序［1］免疫新西兰白兔，免疫中期对兔进行耳缘静脉取血，双向琼脂扩散试验检测抗体效价，效价合格后通过颈动脉采血的方法获得抗血清。

1.2.2 苏丹红I多克隆抗体的纯化

收集的抗血清分别通过辛酸硫酸铵法和亲和层析柱法进行纯化。辛酸硫酸铵法参照文献［2，3］进行。

亲和层析柱的制备方法如下［4，5］：取5 g经环氧氯丙烷偶联活化的琼脂糖［6］，加入10mL氨水以使环氧基团氨解，室温反应过夜。将水解后的琼脂糖载体用蒸馏水大量冲洗并抽滤，加入30 mL 5%的戊二醛溶液，室温反应2 h，用大量蒸馏水冲洗并抽滤，得到带有活性醛基的琼脂糖凝胶。……