沈汪洋，金征宇

(1.武汉工业学院 食品科学与工程学院，湖北武汉 430023;2.江南大学食品科学与工程学院，江苏无锡 214122)

α-半乳糖苷酶(α-Galactosidase，α-Gal;EC 3.2.1.22)是一种外切糖苷酶，可以分解蜜二糖，又称为蜜二糖酶。此酶主要水解以具有α-半乳糖苷结构的碳水化合物，因此又将蜜二糖酶命名为α-半乳糖苷酶［1］。α-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物及微生物中［2］。咖啡豆α-半乳糖苷酶是从咖啡豆中提取得到的一种α-半乳糖苷酶。由于此酶具有三项显著功能而受到研究者的重视：制备环糊精衍生物［3］，法布里病的临床治疗［4］，血型转换研究(B 型血转换成O型血)研究［5］。但是利用传统的方法，从咖啡豆中获得α-Gal不能满足目前的研究需求，酶活较低，成为此酶进一步应用的瓶颈。2005年，Marraccini等［6］报道在发芽咖啡豆中发现 α-Gal的酶活普遍高于咖啡豆(绿咖啡豆)来源的α-Gal酶活。本实验追踪国外报道，在从发芽咖啡豆中提取、分离、纯化得到α-Gal的基础上，深入研究α-Gal的化学修饰，找出该酶的活性中心所需的氨基酸种类和数目，为此酶的进一步应用提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 试剂

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶实验室自制［7］;对硝基苯酚-α-半乳糖苷，碳二亚胺，丁二酮，Sigma公司;焦碳酸二乙酯，对氯汞苯甲酸，二硫苏糖醇，二硫硝基苯甲酸，Amresco公司;N-溴代琥珀酰亚胺，三硝基苯酚，国药集团;其余试剂均为常规分析纯。

1.2 仪器与设备

HT多功能酶标仪：美国Bio-Tek公司;Direct-Q3超纯水系统：美国 Millipore公司;Delta320 pH计：梅特勒-托利多仪器有限公司;HH-2型恒温水浴锅：金坛市荣华仪器制造有限公司。……